| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-14页 |
| 第一章 胰腺癌治疗的研究进展 | 第14-22页 |
| 1.1 胰腺癌的发生和发展 | 第15-16页 |
| 1.2 胰腺癌治疗现状 | 第16-18页 |
| 1.2.1 传统治疗 | 第16页 |
| 1.2.2 单抗药物治疗 | 第16-17页 |
| 1.2.3 小分子靶向药物治疗 | 第17-18页 |
| 1.2.4 疫苗治疗 | 第18页 |
| 1.3 CART在胰腺癌中的探索 | 第18-21页 |
| 1.3.1 CART的概念 | 第18-19页 |
| 1.3.2 胰腺癌抗原表位 | 第19-20页 |
| 1.3.3 CART治疗胰腺癌的现状 | 第20-21页 |
| 1.4 本课题的研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 间皮素CART(mesoCART)细胞的构建和鉴定 | 第22-33页 |
| 2.1 实验器材 | 第22-25页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第22页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.1.5 实验所需试剂配置 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 大量抽提pGH-MESO和pNB338B-EGFP质粒 | 第25页 |
| 2.2.2 酶切和条带回收 | 第25-26页 |
| 2.2.3 连接和转化 | 第26页 |
| 2.2.4 质粒小量抽提和酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.5 电转PBMC获得mesoCART细胞 | 第27-28页 |
| 2.2.6 流式检测mesoCART阳性率 | 第28页 |
| 2.2.7 Westernblot检测mesoCAR的表达情况 | 第28-29页 |
| 2.2.8 RT-PCR检测CD28基因 | 第29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-32页 |
| 2.3.1 MesoCAR基因结构示意图 | 第29-30页 |
| 2.3.2 pNB338B-MESO重组质粒的构建 | 第30页 |
| 2.3.3 MesoCART活化前后细胞形态变化 | 第30-31页 |
| 2.3.4 MesoCART细胞转染效率检测 | 第31-32页 |
| 2.4 结果分析和讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 活化mesoCART细胞的特性分析 | 第33-43页 |
| 3.1 实验器材 | 第33-34页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第33页 |
| 3.1.2 实验材料 | 第33页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-36页 |
| 3.2.1 T细胞活化表型检测 | 第34页 |
| 3.2.2 CCK8细胞增殖实验 | 第34-35页 |
| 3.2.3 T细胞亚群检测 | 第35页 |
| 3.2.4 抗原刺激下T细胞分泌的细胞因子检测 | 第35-36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-42页 |
| 3.3.1 重组MSLN抗原细胞能有效活化MesoCART细胞 | 第36-37页 |
| 3.3.2 MesoCART具有更强的增殖活性 | 第37-38页 |
| 3.3.3 重组MSLN诱导mesoCART分化成CTL和效应记忆T | 第38-40页 |
| 3.3.4 MesoCART细胞能特异性识别MSLN抗原并分泌细胞因子 | 第40-42页 |
| 3.4 结果分析和讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 MesoCART细胞的体外功能分析 | 第43-53页 |
| 4.1 实验器材 | 第43-44页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第43页 |
| 4.1.2 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第43-44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-47页 |
| 4.2.1 Westernblot检测癌细胞MSLN的表达情况 | 第44-45页 |
| 4.2.2 流式检测癌细胞MSLN的表达情况 | 第45-46页 |
| 4.2.3 实时无标记细胞分析仪(RTCA)检测mesoCART细胞对癌细胞的杀伤 | 第46页 |
| 4.2.4 流式检测mesoCART杀伤癌细胞后的细胞因子分泌 | 第46-47页 |
| 4.2.5 体外3D肿瘤多细胞球实验 | 第47页 |
| 4.3 实验结果 | 第47-52页 |
| 4.3.1 从蛋白和细胞水平分析癌细胞MSLN表达情况 | 第47-48页 |
| 4.3.2 MesoCART细胞能显著杀伤MSLN阳性的胰腺癌细胞 | 第48-49页 |
| 4.3.3 MesoCART分泌高水平的细胞因子辅助杀伤 | 第49-50页 |
| 4.3.4 3D肿瘤球模拟mesoCART对胰腺肿瘤的抑制 | 第50-52页 |
| 4.4 结果分析和讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 NSG移植瘤小鼠模型实验 | 第53-62页 |
| 5.1 实验器材 | 第53-54页 |
| 5.1.1 实验仪器 | 第53页 |
| 5.1.2 实验材料试剂 | 第53页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第53-54页 |
| 5.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 5.2.1 胰腺癌荧光素酶报告细胞株(ASPC1-luc)的构建 | 第54页 |
| 5.2.2 MesoCART治疗ASPC1小鼠移植瘤模型的体内实验 | 第54-55页 |
| 5.2.3 MesoCART在小鼠体内的记忆表型和细胞因子分析 | 第55页 |
| 5.2.4 小鼠组织切片的H&E染色 | 第55-56页 |
| 5.3 实验结果 | 第56-61页 |
| 5.3.1 MesoCART能有效抑制ASPC1-luc荷瘤小鼠的肿瘤生长 | 第56-58页 |
| 5.3.2 MesoCART能在体内高效地分泌IFN-γ并分化出记忆性T细胞 | 第58-60页 |
| 5.3.3 MesoCART不会对小鼠重要组织器官产生损伤 | 第60-61页 |
| 5.4 结果分析和讨论 | 第61-62页 |
| 讨论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 本课题基金支持 | 第69页 |
