| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 文献综述 肠杆菌科丝氨酸蛋白酶(SPATEs)的研究进展 | 第9-21页 |
| 1.1 前言 | 第9页 |
| 1.2 V型分泌系统 | 第9-11页 |
| 1.3 SPATEs结构 | 第11-12页 |
| 1.4 SPATEs分类 | 第12-13页 |
| 1.5 SPATE致病机制 | 第13-14页 |
| 1.6 SepA的功能及其致病机制 | 第14-15页 |
| 1.7 总结与展望 | 第15-16页 |
| 参考文献 | 第16-21页 |
| 实验研究 | 第21-46页 |
| 研究一 K88ac~+产肠毒素大肠杆菌sepA基因缺失株的构建 | 第21-32页 |
| 1. 材料 | 第22-23页 |
| 1.1 菌株、质粒 | 第22-23页 |
| 1.2 培养基和主要试剂 | 第23页 |
| 1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2. 方法 | 第23-28页 |
| 2.1 sepA基因缺失引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2 融合PCR产物的制备和纯化 | 第24-25页 |
| 2.3 感受态细胞的制备及转化 | 第25-26页 |
| 2.3.1 感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.3.2 质粒pKD46的转化 | 第25页 |
| 2.3.3 Red重组酶的诱导和感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 2.4 融合PCR产物电转化 | 第26页 |
| 2.5 一次同源重组菌△sepA::cat的PCR鉴定 | 第26页 |
| 2.6 质粒pKD46的消除 | 第26-27页 |
| 2.7 FLP位点专一性重组 | 第27页 |
| 2.8 第二次重组菌的鉴定 | 第27页 |
| 2.9 回补株的构建 | 第27-28页 |
| 3. 结果 | 第28-30页 |
| 3.1 融合PCR产物的制备 | 第28页 |
| 3.2 第一次重组菌/△sepA::cat的PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 3.3 第二次重组菌△sepA的鉴定 | 第29-30页 |
| 3.4 回补株的构建 | 第30页 |
| 4. 讨论 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-32页 |
| 研究二 K88ac~+产肠毒素大肠杆菌SepA相关功能探析 | 第32-46页 |
| 1、材料 | 第33-34页 |
| 1.1 菌株、质粒、细胞系 | 第33页 |
| 1.2 主要试剂及配制 | 第33页 |
| 1.3 仪器设备 | 第33-34页 |
| 1.4 实验动物 | 第34页 |
| 2. 方法 | 第34-38页 |
| 2.1 生长曲线检测 | 第34页 |
| 2.2 IPEC-J2细胞黏附实验 | 第34-35页 |
| 2.2.1 IPEC-J2细胞的培养和传代 | 第34页 |
| 2.2.2 IPEC-J2细胞黏附实验 | 第34-35页 |
| 2.3 荧光定量PCR定量分析实验 | 第35-37页 |
| 2.3.1 毒力相关基因引物的设计 | 第35页 |
| 2.3.2 总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.3.3 cDNA的合成 | 第36-37页 |
| 2.3.4 Real Time PCR反应 | 第37页 |
| 2.4 兔回肠结扎实验 | 第37-38页 |
| 3. 结果 | 第38-43页 |
| 3.1 生长曲线实验 | 第38-39页 |
| 3.2 IPEC-J2细胞黏附实验 | 第39页 |
| 3.3 荧光定量PCR实验 | 第39-40页 |
| 3.4 兔回肠结扎实验 | 第40-43页 |
| 3.4.1 细菌的培养与计数 | 第40-41页 |
| 3.4.2 回肠肠腔积液量 | 第41-42页 |
| 3.4.3 回肠组织病理切片图 | 第42-43页 |
| 4. 讨论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-46页 |
| 全文小结 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
