| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 单宁 | 第11-13页 |
| 1.1.1 单宁的分类 | 第11-12页 |
| 1.1.2 单宁的微生物降解 | 第12-13页 |
| 1.2 单宁酶 | 第13-17页 |
| 1.2.1 单宁酶的性质 | 第13-14页 |
| 1.2.2 单宁酶酶活测定方法的建立 | 第14-15页 |
| 1.2.3 单宁酶的纯化 | 第15-16页 |
| 1.2.4 单宁酶的工业应用 | 第16-17页 |
| 1.3 单宁酶的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.1 产单宁酶微生物 | 第17-18页 |
| 1.3.2 黑曲霉中单宁酶的表达水平现状 | 第18页 |
| 1.4 本论文的主要研究内容 | 第18-20页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第18-19页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第19-20页 |
| 第二章 黑曲霉基因组单宁酶基因的挖掘及高效表达工程菌的筛选 | 第20-53页 |
| 2.1 引言 | 第20-21页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第21-28页 |
| 2.2.1 质粒与菌种 | 第21页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第21-23页 |
| 2.2.3 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.2.4 实验设备 | 第26-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-39页 |
| 2.3.1 黑曲霉基因组中的单宁酶基因 | 第28-29页 |
| 2.3.2 单宁酶表达载体的构建 | 第29-34页 |
| 2.3.3 无孢黑曲霉Bdel4的转化 | 第34-35页 |
| 2.3.4 单宁酶基因过量表达转化子的筛选 | 第35-36页 |
| 2.3.5 酶活测定方法 | 第36-37页 |
| 2.3.6 蛋白含量的测定方法 | 第37-38页 |
| 2.3.7 高产单宁酶菌株的发酵 | 第38-39页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第39-51页 |
| 2.4.1 黑曲霉基因组中的单宁酶基因分析结果 | 第39页 |
| 2.4.2 单宁酶表达载体的构建 | 第39-42页 |
| 2.4.3 不同单宁酶基因过量表达株的转化与鉴定 | 第42-45页 |
| 2.4.4 重组单宁酶菌株的筛选 | 第45-49页 |
| 2.4.5 高产重组单宁酶菌株的发酵 | 第49-51页 |
| 2.5 本章小结 | 第51-53页 |
| 第三章 重组单宁酶的蛋白纯化及酶学性质研究 | 第53-64页 |
| 3.1 引言 | 第53页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第53-55页 |
| 3.2.1 质粒与菌种 | 第53页 |
| 3.2.2 实验材料 | 第53-55页 |
| 3.2.3 实验设备 | 第55页 |
| 3.3 实验方法 | 第55-58页 |
| 3.3.1 重组单宁酶的蛋白纯化 | 第55-56页 |
| 3.3.2 重组单宁酶的去糖基化 | 第56-57页 |
| 3.3.3 纯化后蛋白的银染 | 第57-58页 |
| 3.3.4 重组单宁酶的酶学性质研究 | 第58页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第58-62页 |
| 3.4.1 单宁酶的蛋白纯化结果 | 第58-60页 |
| 3.4.2 重组单宁酶糖基化的鉴定 | 第60-61页 |
| 3.4.3 重组单宁酶的酶学性质研究 | 第61-62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-64页 |
| 结论与展望 | 第64-66页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 本论文创新点 | 第65页 |
| 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 附录 | 第71-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 附件 | 第79页 |