| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 生物固氮 | 第12页 |
| 1.2 豆科植物与根瘤菌的共生固氮 | 第12-17页 |
| 1.2.1 豆科植物 | 第12页 |
| 1.2.2 根瘤菌 | 第12-13页 |
| 1.2.3 根瘤的形成过程 | 第13页 |
| 1.2.4 根瘤的类型 | 第13-14页 |
| 1.2.5 根瘤菌中与共生固氮相关的基因 | 第14-15页 |
| 1.2.6 豆科植物中早期结瘤信号的传输过程 | 第15-17页 |
| 1.3 发根农杆菌介导的植物转化技术 | 第17-18页 |
| 1.3.1 发根农杆菌 | 第17页 |
| 1.3.2 毛状根的转化过程 | 第17页 |
| 1.3.3 植物转化受体系统-愈伤组织再生系统 | 第17-18页 |
| 1.3.4 影响毛状根转化成功的因素 | 第18页 |
| 1.3.5 发根农杆菌遗传转化的应用 | 第18页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 1.5 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.3 培养基及试剂配方 | 第21-22页 |
| 2.1.4 实验分子试剂 | 第22页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-32页 |
| 2.2.1 分子生物学实验方法 | 第23页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第23页 |
| 2.2.3 Trizol 法提取刺槐总 RNA | 第23-24页 |
| 2.2.4 刺槐总 RNA 纯化及反转录 | 第24-25页 |
| 2.2.5 PCR 反应体系及反应条件 | 第25页 |
| 2.2.6 目的基因表达的 qRT-PCR 分析 | 第25-26页 |
| 2.2.7 Gateway BP 重组反应 | 第26-27页 |
| 2.2.8 过量表达载体及瞬时表达载体的构建 | 第27页 |
| 2.2.9 水培法种植刺槐苗 | 第27-28页 |
| 2.2.10 发根农杆菌介导的刺槐转化体系的建立 | 第28-29页 |
| 2.2.11 目的基因在洋葱表皮的瞬时表达 | 第29-31页 |
| 2.2.12 根瘤石蜡切片的制作 | 第31-32页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第32-48页 |
| 3.1 目的基因相关信息 | 第32页 |
| 3.2 目的基因的扩增 | 第32-34页 |
| 3.2.1 刺槐根部总 RNA 的提取与检测 | 第32页 |
| 3.2.2 总 RNA 的反转录 | 第32-33页 |
| 3.2.3 目的基因片段的扩增 | 第33页 |
| 3.2.4 目的基因与 T 载体的连接 | 第33-34页 |
| 3.3 载体的构建及转化农杆菌 | 第34-37页 |
| 3.3.1 过表达载体构建结果 | 第34-35页 |
| 3.3.2 RNAi 载体构建结果 | 第35-36页 |
| 3.3.3 亚细胞定位载体构建结果 | 第36-37页 |
| 3.3.4 过表达载体及 RNAi 载体转化 K599 发根农杆菌 | 第37页 |
| 3.4 目的基因在洋葱表皮细胞的定位 | 第37-38页 |
| 3.5 过量表达结果 | 第38-42页 |
| 3.5.1 GUS 基因的扩增及 GUS 染色 | 第38-39页 |
| 3.5.2 目的基因的过量表达效率检测 | 第39-40页 |
| 3.5.3 转化植株的表型观察与统计 | 第40-41页 |
| 3.5.4 根瘤的石蜡切片观察 | 第41-42页 |
| 3.6 RNAi 干扰结果 | 第42-46页 |
| 3.6.1 GUS 基因的扩增检测及 GUS 染色 | 第42页 |
| 3.6.2 目的基因的沉默效率检测 | 第42-43页 |
| 3.6.3 转化植株的表型观察与统计 | 第43-44页 |
| 3.6.4 根瘤的石蜡切片 | 第44-45页 |
| 3.6.5 荧光显微镜下观察根瘤的形成过程 | 第45-46页 |
| 3.7 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 结论与创新 | 第48-49页 |
| 4.1 实验结论 | 第48页 |
| 4.1.1 亚细胞定位 | 第48页 |
| 4.1.2 基因功能验证 | 第48页 |
| 4.2 实验的创新点 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 附录 1 | 第56-58页 |
| 附录 2 | 第58-60页 |
| 附录 3 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |