无机磷胁迫条件下的东海原甲藻差异表达基因的克隆与分析
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 赤潮概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 赤潮的定义和分类 | 第10-11页 |
| 1.1.2 赤潮的形成因素和危害 | 第11-12页 |
| 1.1.3 赤潮的预防和治理 | 第12-13页 |
| 1.2 东海原甲藻赤潮 | 第13-15页 |
| 1.2.1 光照强度和时间对东海原甲藻的影响 | 第13-14页 |
| 1.2.2 温度对东海原甲藻的影响 | 第14页 |
| 1.2.3 营养盐对东海原甲藻的影响 | 第14-15页 |
| 1.3 差异性表达基因的分子生物学研究方法 | 第15-17页 |
| 1.3.1 mRNA差异显示技术 | 第15页 |
| 1.3.2 代表性差异分析法 | 第15页 |
| 1.3.3 限制性差异显示技术（RFDD） | 第15-16页 |
| 1.3.4 抑制性差减杂交技术 | 第16页 |
| 1.3.5 表达序列标签技术 | 第16-17页 |
| 1.4 无机磷限制条件下东海原甲藻相关研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4.1 国内研究进展 | 第17页 |
| 1.4.2 国外研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5 本课题研究的内容和意义 | 第18-20页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第18-19页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第19-20页 |
| 第二章 东海原甲藻磷胁迫抑制性差减杂交文库的构建 | 第20-49页 |
| 2.1 引言 | 第20-21页 |
| 2.2 材料与方法 | 第21-32页 |
| 2.2.1 实验藻种及培养 | 第21页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第22页 |
| 2.2.4 磷胁迫处理 | 第22页 |
| 2.2.5 总mRNA的提取和定量 | 第22-23页 |
| 2.2.6 Firststrand的反转录 | 第23-24页 |
| 2.2.7 LD–PCR | 第24-25页 |
| 2.2.8 PCR产物的纯化回收 | 第25-26页 |
| 2.2.9 Rsa I酶切消化 | 第26-27页 |
| 2.2.10 酶切ds cDNA的纯化 | 第27页 |
| 2.2.11 接头连接和连接效率的检测 | 第27-29页 |
| 2.2.12 第一轮差减杂交 | 第29页 |
| 2.2.13 第二轮差减杂交 | 第29-30页 |
| 2.2.14 第一轮巢式PCR扩增 | 第30页 |
| 2.2.15 第二轮巢式PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.16 T–A克隆 | 第31-32页 |
| 2.2.17 阳性克隆的菌落PCR鉴定 | 第32页 |
| 2.2.18 阳性克隆测序及序列分析 | 第32页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第32-48页 |
| 2.3.1 总mRNA的提取和定量 | 第32-33页 |
| 2.3.2 PCR循环数的优化 | 第33-34页 |
| 2.3.3 Rsa I酶切效率检测 | 第34-35页 |
| 2.3.4 接头连接效率的检测 | 第35-36页 |
| 2.3.5 两轮巢式PCR扩增差异表达基因 | 第36-37页 |
| 2.3.6 阳性克隆的检测 | 第37-38页 |
| 2.3.7 测序及生物信息学分析 | 第38-48页 |
| 2.4 本章小结 | 第48-49页 |
| 第三章 差异表达基因的荧光定量PCR实验确认 | 第49-59页 |
| 3.1 引言 | 第49页 |
| 3.2 材料与方法 | 第49-51页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第49页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第49页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第49页 |
| 3.2.4 磷胁迫处理 | 第49-50页 |
| 3.2.5 mRNA的提取和定量 | 第50页 |
| 3.2.6 总mRNA的反转录 | 第50页 |
| 3.2.7 特异性引物设计 | 第50-51页 |
| 3.2.8 荧光定量PCR反应 | 第51页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第51-58页 |
| 3.3.1 总mRNA的提取和定量 | 第51-52页 |
| 3.3.2 引物的常规PCR验证 | 第52-53页 |
| 3.3.3 荧光定量PCR实验结果 | 第53-58页 |
| 3.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及其它成果 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
