| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 miRNA简介 | 第12-16页 |
| 1.1.1 miRNA的发现 | 第12页 |
| 1.1.2 miRNA的生物合成及动植物miRNA的区别 | 第12-15页 |
| 1.1.3 miRNA的生物学功能 | 第15-16页 |
| 1.2 miRNA的检测方法 | 第16-18页 |
| 1.2.1 Northern blotting | 第16页 |
| 1.2.2 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第16-17页 |
| 1.2.3 miRNA芯片技术 | 第17页 |
| 1.2.4 高通量测序 | 第17-18页 |
| 1.3 miRNA靶基因的预测和鉴定 | 第18-19页 |
| 1.3.1 miRNA靶基因的预测方法 | 第18-19页 |
| 1.3.2 miRNA靶基因的鉴定方法 | 第19页 |
| 1.4 miRNA跨物种调控的研究概况 | 第19-22页 |
| 1.4.1 miRNA跨物种调节靶基因mRNA的研究 | 第19-20页 |
| 1.4.2 植物miRNA跨物种调控的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4.3 对植物miRNA跨物种调控的质疑 | 第21-22页 |
| 1.5 本试验的研究内容及意义 | 第22-23页 |
| 2 试验材料及仪器 | 第23-24页 |
| 2.1 试验材料 | 第23页 |
| 2.1.1 试验动物、玉米及细胞系 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 3 试验方法 | 第24-36页 |
| 3.1 下载公共数据分析猪体内植物miRNA | 第24-26页 |
| 3.1.1 下载公共测序数据 | 第24-25页 |
| 3.1.2 剔除低质量序列 | 第25页 |
| 3.1.3 初步筛选植物miRNA | 第25页 |
| 3.1.4 进一步筛选植物miRNA | 第25页 |
| 3.1.5 排除细菌、真菌、古生菌的干扰 | 第25-26页 |
| 3.2 动物饲喂及样品采集 | 第26-27页 |
| 3.2.1 动物饲喂及血液的采集 | 第26页 |
| 3.2.2 血清exosomes的分离 | 第26页 |
| 3.2.3 动物组织的采集 | 第26-27页 |
| 3.3 实时荧光定量PCR | 第27-30页 |
| 3.3.1 miRNA的选择及引物设计 | 第27页 |
| 3.3.2 RNA的提取 | 第27-28页 |
| 3.3.3 miRNA反转录及荧光定量 | 第28-29页 |
| 3.3.4 荧光定量PCR产物的TA克隆及Sanger测序 | 第29-30页 |
| 3.4 zma-miR164a-5p的靶基因预测及鉴定 | 第30-36页 |
| 3.4.1 zma-miR164a-5p的靶基因预测 | 第30-31页 |
| 3.4.2 Mir-Trap鉴定预测的靶基因 | 第31-33页 |
| 3.4.3 双荧光素酶报告系统验证zma-miR164a-5p与靶基因的靶标关系 | 第33-36页 |
| 4 结果与分析 | 第36-46页 |
| 4.1 从NCBI下载的猪测序数据中植物miRNA的分析结果 | 第36-37页 |
| 4.2 猪体内玉米miRNA的检测结果 | 第37-42页 |
| 4.2.1 RNA提取质量的鉴定 | 第37页 |
| 4.2.2 荧光定量结果 | 第37-41页 |
| 4.2.3 TA克隆及Sanger测序验证定量产物 | 第41-42页 |
| 4.3 zma-miR164a-5p的靶基因预测和鉴定结果 | 第42-46页 |
| 4.3.1 zma-miR164a-5p在猪体内潜在靶基因的预测结果 | 第42-43页 |
| 4.3.2 Mir-Trap验证zma-miR164a-5p在猪体内15个潜在的靶基因 | 第43页 |
| 4.3.3 双荧光素酶报告系统验证zma-miR164a-5p在猪体内的潜在靶基因 | 第43-46页 |
| 5 讨论 | 第46-50页 |
| 5.1 猪血液中植物miRNA的变化规律 | 第46页 |
| 5.2 猪组织中植物miRNA的变化规律 | 第46页 |
| 5.3 miRNA靶标关系的验证方法 | 第46-47页 |
| 5.4 植物miRNA与动物mRNA的靶标关系验证 | 第47-48页 |
| 5.5 植物miRNA跨物种调控动物mRNA | 第48-50页 |
| 5.5.1 研究方法的讨论 | 第48-49页 |
| 5.5.2 存在问题及展望 | 第49-50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 7 参考文献 | 第51-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 附录 | 第60-62页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第62页 |
