| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 引言 | 第11-19页 |
| 1.1 植物油供求现状及意义 | 第11-12页 |
| 1.2 植物油脂合成途径 | 第12-13页 |
| 1.3 植物油合成相关转录因子研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3.1 油脂积累相关B3家族转录因子 | 第13-14页 |
| 1.3.2 油脂积累相关HAP3家族转录因子 | 第14页 |
| 1.3.3 其他油脂积累相关的转录调控因子 | 第14-15页 |
| 1.4 AP2/EREBP转录因子超家族 | 第15-16页 |
| 1.5 转录因子WRI1的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.5.1 转录因子WRI1的发现及结构 | 第16页 |
| 1.5.2 转录因子WRI1的功能分析 | 第16-17页 |
| 1.6 酵母单杂交技术 | 第17页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二章 AhWRI1-1和AhWRI1-2基因的表达特异性研究 | 第19-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂及仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-26页 |
| 2.2.1 非生物逆境胁迫和激素处理方法 | 第20页 |
| 2.2.2 基因的克隆 | 第20-26页 |
| 2.2.2.1 总RNA提取 | 第20-21页 |
| 2.2.2.2 反转录合成第一链cDNA | 第21页 |
| 2.2.2.3 目的基因的获得 | 第21-22页 |
| 2.2.2.4 PCR反应产物的回收 | 第22-23页 |
| 2.2.2.5 目的基因与克隆载体的连接 | 第23页 |
| 2.2.2.6 大肠杆菌的转化 | 第23页 |
| 2.2.2.7 质粒的提取 | 第23页 |
| 2.2.2.8 质粒的双酶切验证 | 第23-24页 |
| 2.2.2.9 生物信息学分析 | 第24页 |
| 2.2.2.10 系统发育树分析 | 第24页 |
| 2.2.2.11 实时荧光定量PCR | 第24-25页 |
| 2.2.2.12 转录因子酵母转录激活活性分析 | 第25-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-35页 |
| 2.3.1 基因的克隆 | 第26-27页 |
| 2.3.2 基因的生物信息学分析 | 第27-32页 |
| 2.3.2.1 基因序列分析 | 第27-29页 |
| 2.3.2.2 编码蛋白的理化性质及结构分析 | 第29-30页 |
| 2.3.2.3 系统发育分析 | 第30-32页 |
| 2.3.3 基因表达特性分析 | 第32-34页 |
| 2.3.3.1 基因在不同组织及种子不同发育时期的表达特性 | 第32页 |
| 2.3.3.2 基因在非生物胁迫下的表达特性 | 第32-33页 |
| 2.3.3.3 基因在植物激素处理下的表达特性 | 第33-34页 |
| 2.3.4 转录激活活性分析 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 亚细胞定位及重组蛋白的表达 | 第37-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 主要酶、菌种及质粒 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂与仪器 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-43页 |
| 3.2.1 亚细胞定位分析 | 第38-40页 |
| 3.2.1.1 重组质粒载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.2.1.2 拟南芥原生质体的提取 | 第39页 |
| 3.2.1.3 PEG介导重组载体的转化 | 第39-40页 |
| 3.2.1.4 激光扫描共聚焦显微镜下荧光信号的观察 | 第40页 |
| 3.2.2 目的蛋白的原核表达 | 第40-41页 |
| 3.2.2.1 原核表达载体构建 | 第40页 |
| 3.2.2.2 选择表达菌株和最佳诱导温度 | 第40-41页 |
| 3.2.2.3 选择最佳诱导时间 | 第41页 |
| 3.2.3 SDS-PAGE电泳检测方法 | 第41-43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-46页 |
| 3.3.1 拟南芥原生质体中两基因的亚细胞定位 | 第43-44页 |
| 3.3.2 目的蛋白的原核表达 | 第44-46页 |
| 3.3.2.1 融合蛋白表达菌株和最佳诱导温度的选择 | 第44-45页 |
| 3.3.2.2 融合蛋白最佳诱导时间的选择 | 第45-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 拟南芥及烟草的遗传转化 | 第47-58页 |
| 4.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第47页 |
| 4.1.2 主要试剂及仪器 | 第47-48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-53页 |
| 4.2.1 植物叶片基因组DNA快速提取方法 | 第48页 |
| 4.2.2 植物表达载体构建 | 第48页 |
| 4.2.3 农杆菌感受态的制备 | 第48-49页 |
| 4.2.4 拟南芥的遗传转化 | 第49-50页 |
| 4.2.4.1 冻融法转化EHA105农杆菌以及阳性克隆的筛选 | 第49页 |
| 4.2.4.2 拟南芥待转化植株的培养 | 第49-50页 |
| 4.2.4.3 农杆菌侵染拟南芥 | 第50页 |
| 4.2.4.4 拟南芥转化子的筛选和鉴定 | 第50页 |
| 4.2.5 烟草的遗传转化 | 第50-53页 |
| 4.2.5.1 电击法转化农杆菌 | 第50-51页 |
| 4.2.5.2 烟草无菌苗的培养 | 第51页 |
| 4.2.5.3 农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第51-53页 |
| 4.2.6 转基因植株种子油脂含量分析 | 第53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-56页 |
| 4.3.1 转基因拟南芥的分子生物学检测 | 第53-54页 |
| 4.3.2 转基因拟南芥的遗传稳定性分析 | 第54页 |
| 4.3.3 转基因烟草的分子生物学检测 | 第54-56页 |
| 4.3.4 转基因植株种子含油量分析 | 第56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读硕士期间发表学术论文目录 | 第67-68页 |
