| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-9页 |
| 第1章 绪论 | 第14-22页 |
| 1.1 决明简介 | 第14-16页 |
| 1.1.1 决明生物学特征 | 第14-15页 |
| 1.1.2 决明子的主要活性成分 | 第15-16页 |
| 1.2 胰蛋白酶抑制剂的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2.1 胰蛋白酶抑制剂简介 | 第16页 |
| 1.2.2 胰蛋白酶抑制剂分类 | 第16页 |
| 1.2.3 胰蛋白酶抑制剂的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3 胰蛋白酶抑制剂的应用 | 第19-20页 |
| 1.3.1 农业和养植方面的应用 | 第19页 |
| 1.3.2 临床应用 | 第19-20页 |
| 1.4 研究意义及内容 | 第20-22页 |
| 第2章 COTI1的抗虫效用及对中肠相关基因表达模式的影响 | 第22-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 动物材料 | 第22页 |
| 2.1.3 其他试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 蛋白COTI1的表达 | 第23页 |
| 2.2.2 蛋白COTI1的纯化及浓度测定 | 第23-24页 |
| 2.2.3 COTI1蛋白对菜青虫生长发育的影响 | 第24页 |
| 2.2.4 COTI1蛋白对牛胰蛋白酶及中肠蛋白酶的抑制活性 | 第24-25页 |
| 2.2.5 中肠RNA提取及cDNA合成 | 第25-26页 |
| 2.2.6 特异性引物的设计 | 第26-27页 |
| 2.2.7 中肠消化解毒相关基因的RT-qPCR扩增 | 第27页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第27-32页 |
| 2.3.1 蛋白COTI1的表达 | 第27-28页 |
| 2.3.2 蛋白COTI1的纯化及浓度测定 | 第28-29页 |
| 2.3.3 COTI1蛋白对菜青虫的生长发育及中肠酶的抑制 | 第29页 |
| 2.3.4 中肠组织RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.3.5 引物特异性检测 | 第30-31页 |
| 2.3.6 中肠相关基因表达模式分析 | 第31-32页 |
| 2.4 本章小结 | 第32-34页 |
| 第3章 转COTI2基因拟南芥的获得 | 第34-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 3.1.2 其他试剂及菌种 | 第34-35页 |
| 3.2 试验方法 | 第35-37页 |
| 3.2.1 重组真核表达载体的提取 | 第35页 |
| 3.2.2 重组农杆菌GV3101的构建 | 第35-36页 |
| 3.2.3 野生型拟南芥的种植 | 第36页 |
| 3.2.4 转染野生型拟南芥 | 第36-37页 |
| 3.2.5 转基因拟南芥阳性苗的筛选 | 第37页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第37-41页 |
| 3.3.1 重组真核表达载体的提取与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3.2 重组农杆菌GV3101的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.3 野生型拟南芥的种植 | 第39页 |
| 3.3.4 转基因拟南芥阳性苗的筛选 | 第39-41页 |
| 3.4 本章小结 | 第41-42页 |
| 第4章 拟南芥的萌发率和侧根生长情况 | 第42-50页 |
| 4.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第42-43页 |
| 4.1.2 其他试剂 | 第43页 |
| 4.2 试验方法 | 第43-44页 |
| 4.2.1 培养基的配置 | 第43页 |
| 4.2.2 种子的萌发 | 第43-44页 |
| 4.2.3 幼苗胁迫处理 | 第44页 |
| 4.2.4 表型观察以及根系分析 | 第44页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第44-48页 |
| 4.3.1 种子的萌发率 | 第44-45页 |
| 4.3.2 幼苗胁迫表型观察 | 第45-47页 |
| 4.3.3 胁迫条件下侧根分析 | 第47-48页 |
| 4.4 本章小结 | 第48-50页 |
| 第5章 拟南芥土培胁迫表型及叶片相对含水量 | 第50-58页 |
| 5.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第50页 |
| 5.1.2 其他试剂 | 第50-51页 |
| 5.2 实验方法 | 第51-52页 |
| 5.2.1 种子的春化及萌发 | 第51页 |
| 5.2.2 幼苗的移植培养 | 第51页 |
| 5.2.3 植株胁迫处理 | 第51-52页 |
| 5.2.4 拟南芥叶片相对含水量测定 | 第52页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第52-56页 |
| 5.3.1 拟南芥盐胁迫表型分析 | 第52-54页 |
| 5.3.2 拟南芥干旱胁迫表型分析 | 第54-55页 |
| 5.3.3 拟南芥叶片的相对含水量 | 第55-56页 |
| 5.4 本章小结 | 第56-58页 |
| 第6章 COTI2基因在不同胁迫下表达模式 | 第58-64页 |
| 6.1 实验材料 | 第58页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第58页 |
| 6.1.2 其他试剂 | 第58页 |
| 6.2 试验方法 | 第58-61页 |
| 6.2.1 拟南芥样本获取 | 第58-59页 |
| 6.2.2 RNA提取与cDNA的合成 | 第59页 |
| 6.2.3 特异性引物的设计与检测 | 第59-60页 |
| 6.2.4 拟南芥COTI2基因的RT-qPCR扩增 | 第60-61页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第61-63页 |
| 6.3.1 转基因拟南芥RNA提取 | 第61页 |
| 6.3.2 特异性引物检测 | 第61-62页 |
| 6.3.3 COTI2基因的表达模式分析 | 第62-63页 |
| 6.4 本章小结 | 第63-64页 |
| 第7章 拟南芥蛋白抑制活性测定 | 第64-68页 |
| 7.1 实验材料 | 第64页 |
| 7.1.1 植物材料 | 第64页 |
| 7.1.2 其他试剂 | 第64页 |
| 7.2 试验方法 | 第64-65页 |
| 7.2.1 拟南芥叶片总蛋白的提取 | 第64-65页 |
| 7.2.2 蛋白浓度的测定 | 第65页 |
| 7.2.3 蛋白抑制活性的测定 | 第65页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第65-67页 |
| 7.3.1 拟南芥粗蛋白浓度 | 第65-66页 |
| 7.3.2 拟南芥粗蛋白的抑制活性 | 第66-67页 |
| 7.4 本章小结 | 第67-68页 |
| 第8章 拟南芥的转录组分析 | 第68-72页 |
| 8.1 实验材料 | 第68页 |
| 8.1.1 植物材料 | 第68页 |
| 8.1.2 其他试剂 | 第68页 |
| 8.2 试验方法 | 第68-69页 |
| 8.2.1 样品的获取 | 第68-69页 |
| 8.2.2 转录组测序及分析 | 第69页 |
| 8.3 结果与讨论 | 第69-71页 |
| 8.3.1 干旱胁迫下转COTI2基因与野生型的差异表达基因 | 第69-70页 |
| 8.3.2 盐胁迫下转COTI2基因与野生型的差异表达基因 | 第70-71页 |
| 8.4 本章小结 | 第71-72页 |
| 第9章 COTI2酵母表达系统的构建 | 第72-78页 |
| 9.1 实验材料 | 第72-73页 |
| 9.1.1 实验试剂 | 第72页 |
| 9.1.2 菌种与质粒 | 第72-73页 |
| 9.2 实验方法 | 第73-75页 |
| 9.2.1 含酶切位点的引物设计 | 第73页 |
| 9.2.2 加酶切位点 | 第73页 |
| 9.2.3 真核表达载体构建 | 第73-74页 |
| 9.2.4 转化酿酒酵母 BY4741 | 第74-75页 |
| 9.3 结果与讨论 | 第75-77页 |
| 9.3.1 加酶切位点及双酶切 | 第75-76页 |
| 9.3.2 真核表达载体构建及双酶切鉴定 | 第76-77页 |
| 9.3.3 转化酿酒酵母 | 第77页 |
| 9.4 本章小结 | 第77-78页 |
| 结论 | 第78-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及科研成果 | 第90页 |
