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选择压作用下J亚群禽白血病病毒突变位点的研究

符号说明第4-8页
中文摘要第8-10页
Abstract第10-12页
1 前言第13-24页
    1.1 ALV-J 病原学第13-16页
        1.1.1 ALV 亚群分类第13页
        1.1.2 ALV-J 的病毒及基因组结构第13-16页
    1.2 ALV-J 的流行病学第16-17页
        1.2.1 ALV-J 的危害第16页
        1.2.2 ALV-J 的感染方式第16-17页
    1.3 ALV-J 的临床表现第17-18页
    1.4 ALV-J 的诊断与净化第18-20页
        1.4.1 ALV-J 的诊断第18-19页
        1.4.2 ALV-J 的净化第19-20页
    1.5 ALV-J env 基因研究现状第20-21页
        1.5.1 ALV-J env 基因多态性第20-21页
        1.5.2 功能区对 ALV-J env 基因的影响第21页
    1.6 病毒的跨种传播第21-23页
    1.7 选择压研究现状第23-24页
    1.8 本研究的目的和意义第24页
2 材料与方法第24-35页
    2.1 材料第24-26页
        2.1.1 实验细胞第24页
        2.1.2 实验动物第24-25页
        2.1.3 试验用菌种、病毒第25页
        2.1.4 主要试剂第25-26页
        2.1.5 主要仪器第26页
    2.2 研究方法第26-35页
        2.2.1 试验方案第26-27页
        2.2.2 试验方法第27-35页
            2.2.2.1 ALV-J TCID50的测定第27页
            2.2.2.2 荧光定量 PCR 测定 AZT 最佳作用浓度与时间第27-29页
            2.2.2.3 AZT 作用下 P1-SPF 株的连续传代第29页
            2.2.2.4 AZT 分离株 env 基因 PCR 扩增第29-30页
            2.2.2.5 AZT 分离株 env 基因克隆测序第30-31页
            2.2.2.6 AZT 分离株 env 基因序列分析第31页
            2.2.2.7 鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备第31页
            2.2.2.8 P1-SPF 分离株依次感染不同宿主成纤维细胞第31页
            2.2.2.9 P0-NX0101 株依次体内感染不同品种宿主禽第31-32页
            2.2.2.10 体内感染不同宿主品种禽后病毒血症监测第32-33页
            2.2.2.11 间接免疫荧光(IFA)检测不同品种宿主禽感染情况第33-34页
            2.2.2.12 不同品种宿主禽病毒分离第34页
            2.2.2.13 不同宿主细胞与宿主禽分离株的 env 基因扩增、克隆测序、序列分析第34页
            2.2.1.14 不同品种宿主禽病理学及血液学观察第34-35页
3 结果与分析第35-59页
    3.1 ALV-J TCID50的测定第35页
    3.2 荧光定量 PCR 测定 AZT 最佳作用浓度与时间第35-39页
        3.1.1 标准曲线的建立第35-37页
            3.1.1.1 目的基因的获取第35-36页
            3.1.1.2 目的基因的酶切鉴定第36页
            3.1.1.3 标准曲线建立第36-37页
        3.1.2 病毒生长曲线测定:2-△△CT法第37-38页
        3.1.3 AZT 最佳作用浓度与时间的确定第38-39页
    3.2 AZT 作用下 P1-SPF 株的连续传代第39页
    3.3 AZT 毒 env 基因的扩增,克隆测序,序列分析第39-41页
    3.4 P1-SPF 株依次感染不同品种禽 CEF第41页
    3.5 体内感染不同宿主品种禽后病毒血症监测第41-42页
    3.6 不同宿主禽泄殖腔排毒监测—ALV p27 抗原检测第42-47页
    3.7 不同宿主禽血清中 ALV-J 抗体监测第47-48页
    3.8 间接免疫荧光检测不同品种宿主禽感染情况第48-49页
    3.9 不同宿主细胞与宿主禽分离株的 env 基因扩增、克隆测序、序列分析第49-56页
        3.9.1 宿主禽分离株 RNA 提取及 PCR 扩增第49-50页
        3.9.2 宿主禽分离株 env 基因序列分析第50-56页
    3.10 不同品种宿主禽病理学及血液学观察第56-59页
        3.10.1 病理组织学观察第56-58页
        3.10.2 血液学观察第58-59页
4 讨论第59-63页
5 结论第63-65页
参考文献第65-73页
致谢第73-74页
作者简介及攻读硕士学位发表论文第74页

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