| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-25页 |
| 1.1 小立碗藓 | 第10页 |
| 1.2 小立碗藓的培养 | 第10-12页 |
| 1.2.1 茎叶体的培养 | 第10-11页 |
| 1.2.2 原丝体的培养 | 第11页 |
| 1.2.3 愈伤组织的培养 | 第11-12页 |
| 1.3 小立碗藓生物反应器 | 第12-13页 |
| 1.4 小立碗藓的遗传转化 | 第13-17页 |
| 1.4.1 植物常用的遗传转化方法 | 第13-16页 |
| 1.4.2 苔藓植物遗传转化方法的研究现状 | 第16-17页 |
| 1.5 HSA简介 | 第17-20页 |
| 1.5.1 HSA的分子结构 | 第17页 |
| 1.5.2 HSA的功能 | 第17-19页 |
| 1.5.3 HSA的应用 | 第19-20页 |
| 1.6 HSA的研究进展 | 第20-23页 |
| 1.6.1 HSA的研究进展 | 第20页 |
| 1.6.2 rHSA表达研究 | 第20-23页 |
| 1.6.3 小立碗藓高效表达HSA的影响因素 | 第23页 |
| 1.6.4 HSA的展望 | 第23页 |
| 1.7 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 1.8 主要研究内容和方案 | 第24-25页 |
| 第2章 rHSA基因表达载体的构建及根癌农杆菌的转化 | 第25-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 载体 | 第25页 |
| 2.1.3 培养基及溶液 | 第25-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-33页 |
| 2.2.1 rHSA基因密码子的优化 | 第27页 |
| 2.2.2 引物的设计 | 第27-30页 |
| 2.2.3 PCR扩增步骤及体系 | 第30-32页 |
| 2.2.4 rHSA基因片段的回收 | 第32-33页 |
| 2.3 rHSA基因片段的克隆与分析 | 第33-36页 |
| 2.3.1 大肠杆菌感受态EG60的制备 | 第33页 |
| 2.3.2 热激转化 | 第33-34页 |
| 2.3.3 质粒的抽提 | 第34页 |
| 2.3.4 重组质粒酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.5 rHSA基因的序列测定 | 第35页 |
| 2.3.6 rHSA表达载体构建程序 | 第35页 |
| 2.3.7 根癌农杆菌LB4404的转化 | 第35-36页 |
| 2.4 结果分析 | 第36-38页 |
| 2.4.1 rHSA基因的序列测定 | 第36页 |
| 2.4.2 植物表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 2.4.3 根癌农杆菌的转化与鉴定 | 第37-38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-39页 |
| 第3章 小立碗藓根癌农杆菌转化体系的建立 | 第39-50页 |
| 3.1 实验材料 | 第39-43页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第39页 |
| 3.1.2 农杆菌菌株及质粒 | 第39页 |
| 3.1.3 培养基及培养液 | 第39-43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-44页 |
| 3.2.1 小立碗藓茎叶体的培养 | 第43页 |
| 3.2.2 小立碗藓原丝体的培养 | 第43-44页 |
| 3.3 小立碗藓的遗传转化 | 第44-46页 |
| 3.3.1 根癌农杆菌的的准备 | 第44-45页 |
| 3.3.2 原生质体的制备 | 第45页 |
| 3.3.3 转化过程 | 第45-46页 |
| 3.4 实验结果 | 第46-48页 |
| 3.4.1 小立碗藓茎叶体的培养 | 第46页 |
| 3.4.2 原丝体的培养 | 第46-47页 |
| 3.4.3 原生质体的制备 | 第47页 |
| 3.4.4 转化过程 | 第47-48页 |
| 3.4.5 阳性转化株的筛选 | 第48页 |
| 3.5 讨论 | 第48-50页 |
| 第4章 小立碗藓转化株外源基因表达的检测及测定 | 第50-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第50-52页 |
| 4.1.1 CTAB提取液配方/L | 第50页 |
| 4.1.2 ELISA检测所需溶液 | 第50-51页 |
| 4.1.3 SDS-PAGE电泳溶液 | 第51-52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-57页 |
| 4.2.1 DNA抽提与PCR鉴定 | 第52-53页 |
| 4.2.2 RNA抽提与RT-PCR鉴定 | 第53-54页 |
| 4.2.3 rHSA的分泌表达培养 | 第54-55页 |
| 4.2.4 rHSA的SDS-PAGE | 第55-56页 |
| 4.2.5 rHSA的ELISA定量检测 | 第56-57页 |
| 4.3 结果与分析 | 第57-60页 |
| 4.3.1 PCR检测结果 | 第57页 |
| 4.3.2 RT-PCR检测结果 | 第57-58页 |
| 4.3.3 绿色荧光蛋白基因在植株中的表达 | 第58页 |
| 4.3.4 rHSA的分泌表达培养 | 第58页 |
| 4.3.5 rHSA的SDS-PAGE鉴定 | 第58-59页 |
| 4.3.6 rHSA的ELISA含量测定 | 第59-60页 |
| 4.4 小结 | 第60-61页 |
| 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 附录 | 第68-73页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |