| 摘要 | 第7-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 第一章 前言 | 第16-46页 |
| 1 DNA损伤修复 | 第16-28页 |
| 1.1 DNA损伤的诱因与造成的损伤类型 | 第16页 |
| 1.2 DNA双链断裂损伤 | 第16-17页 |
| 1.3 DNA双链断裂损伤(DSB)的应答与修复 | 第17-23页 |
| 1.3.1 DSB损伤的应答与修复机制 | 第17-23页 |
| 1.3.1.1 DSB损伤识别 | 第17-18页 |
| 1.3.1.2 DSB诱导的细胞周期阻滞 | 第18-19页 |
| 1.3.1.3 DSB损伤的修复 | 第19-23页 |
| 1.4 DSB损伤与细胞凋亡 | 第23-24页 |
| 1.5 DSB损伤与肿瘤发生 | 第24-25页 |
| 1.6 DNA损伤相关抗肿瘤药物的研究状况与进展 | 第25-28页 |
| 2 蛋白相互作用研究方法 | 第28-31页 |
| 2.1 酵母双杂交 | 第28-29页 |
| 2.2 蛋白质芯片 | 第29-30页 |
| 2.3 串联亲和纯化与生物质谱鉴定的方法 | 第30-31页 |
| 3 定量蛋白质组学 | 第31-34页 |
| 3.1 稳定同位素体外标记定量方法 | 第32-34页 |
| 3.1.1 ICAT | 第32-33页 |
| 3.1.2 iTRAQ和mTRAQ | 第33页 |
| 3.1.3 proteolytic ~(18)O标记技术 | 第33-34页 |
| 3.2 稳定同位素体内标记方法 | 第34页 |
| 4 本论文的选题目的及意义 | 第34-36页 |
| 参考文献 | 第36-46页 |
| 第二章 不同类型细胞对博莱霉素诱导的DNA损伤应答研究 | 第46-59页 |
| 1 引言 | 第46-49页 |
| 2 实验部分 | 第49-51页 |
| 2.1 化学试剂、抗体及细胞 | 第49-50页 |
| 2.2 博莱霉素(bleomycin,BLM)刺激细胞条件优化 | 第50页 |
| 2.3 蛋白质分部提取 | 第50页 |
| 2.4 免疫印迹 | 第50-51页 |
| 3 结果与讨论 | 第51-53页 |
| 4 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 第三章 定量蛋白质组学结合生物学手段解析博莱霉素诱导DNA损伤状况下,肝癌细胞中14-3-3 ε相互作用复合物研究 | 第59-97页 |
| 1 引言 | 第59-61页 |
| 2 实验部分 | 第61-66页 |
| 2.1 化学试剂、抗体及细胞 | 第61-62页 |
| 2.2 哺乳动物细胞表达载体与基因克隆 | 第62页 |
| 2.3 稳定细胞株的构建 | 第62-63页 |
| 2.4 稳定细胞株的鉴定 | 第63页 |
| 2.5 博莱霉素刺激细胞条件优化 | 第63页 |
| 2.6 细胞培养与体内稳定同位素标记 | 第63-64页 |
| 2.7 蛋白质的提取与复合物的纯化 | 第64页 |
| 2.8 SDS-PAGE、酶解及提肽 | 第64-65页 |
| 2.9 酶解肽段的液相色谱分离 | 第65页 |
| 2.10 数据库搜索与蛋白质鉴定 | 第65-66页 |
| 2.11 免疫沉淀与免疫印迹 | 第66页 |
| 3 结果与讨论 | 第66-86页 |
| 3.1 稳定细胞株的构建与鉴定 | 第66-67页 |
| 3.2 博莱霉素刺激细胞条件的优化 | 第67-68页 |
| 3.3 稳定同位素体内双标签蛋白质复合物鉴定策略 | 第68-73页 |
| 3.4 博莱霉素诱导状况下14-3-3ε相互作用复合物分析 | 第73-74页 |
| 3.5 验证质谱鉴定到的14-3-3ε特异性相互作用分子 | 第74-77页 |
| 3.6 博莱霉素诱导的14-3-3ε相互作用的蛋白质功能分析 | 第77-80页 |
| 3.7 博莱霉素诱导的14-3-3ε与TAKl相互作用的生物学功能分析 | 第80-86页 |
| 3.7.1 功能分析TAK1上介导14-3-3ε结合的结构域 | 第80-82页 |
| 3.7.2 功能分析TAK1与14-3-3ε相互作用的生物学意义 | 第82-86页 |
| 4 结论 | 第86-89页 |
| 参考文献 | 第89-97页 |
| 第四章 博莱霉素诱导DNA损伤状况下,MVP与14-3-3ε相互作用研究 | 第97-122页 |
| 1 引言 | 第97-100页 |
| 2 实验部分 | 第100-103页 |
| 2.1 化学试剂、抗体、细胞和siRNA | 第100-101页 |
| 2.2 哺乳动物细胞表达载体与基因克隆 | 第101-102页 |
| 2.3 稳定细胞株的构建 | 第102页 |
| 2.4 稳定细胞株的鉴定 | 第102页 |
| 2.5 博莱霉素刺激条件优化 | 第102页 |
| 2.6 蛋白质提取和FLAG-14-3-3ε相互作用复合物的纯化 | 第102页 |
| 2.7 SDS-PAGE分离、酶解及提肽 | 第102页 |
| 2.8 酶解肽段的液相色谱分离 | 第102页 |
| 2.9 数据库搜索与蛋白质鉴定 | 第102页 |
| 2.10 免疫沉淀与免疫印迹 | 第102-103页 |
| 2.11 细胞转染与siRNA干扰 | 第103页 |
| 3 结果与讨论 | 第103-116页 |
| 3.1 稳定细胞株的构建与鉴定 | 第103-104页 |
| 3.2 博莱霉素刺激细胞条件优化 | 第104-105页 |
| 3.3 MVP/vault的质谱鉴定 | 第105-106页 |
| 3.4 MVP/vault是博莱霉素诱导的特异性相互作用 | 第106-107页 |
| 3.5 MVP上14-3-3ε结合位点分析 | 第107-110页 |
| 3.6 MVP与14-3-3ε相互作用的生物学功能分析 | 第110-116页 |
| 3.6.1 过表达实验 | 第110-116页 |
| 4 结论 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-122页 |
| 第五章 肝癌细胞QGY-7703中14-3-3ε天然复合物状况研究 | 第122-140页 |
| 1 引言 | 第122-123页 |
| 2 实验部分 | 第123-126页 |
| 2.1 化学试剂、抗体及细胞 | 第123-124页 |
| 2.2 哺乳动物细胞表达载体与基因克隆 | 第124页 |
| 2.3 稳定细胞株的构建 | 第124页 |
| 2.4 稳定细胞株的鉴定 | 第124-125页 |
| 2.5 细胞培养和体内稳定同位素标记 | 第125页 |
| 2.6 蛋白质的提取和复合物的纯化 | 第125页 |
| 2.7 SDS-PAGE、酶解即提肽 | 第125页 |
| 2.8 酶解肽段的液相色谱分离 | 第125页 |
| 2.9 数据库搜索与蛋白质鉴定 | 第125-126页 |
| 2.10 免疫沉淀(immunoprecipitation)和免疫印迹(immunoblotting) | 第126页 |
| 3 结果与讨论 | 第126-133页 |
| 3.1 稳定细胞株的构建与鉴定 | 第126-128页 |
| 3.2 稳定同位素体内“双标签”蛋白质复合物鉴定策略 | 第128-129页 |
| 3.3 肝癌细胞中14-3-3ε天然相互作用复合物分析 | 第129-133页 |
| 3.3.1 14-3-3ε相互作用蛋白验证 | 第130-132页 |
| 3.3.2 肝癌细胞中14-3-3ε天然蛋白质复合物的功能分类 | 第132-133页 |
| 4 结论 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第135-140页 |
| 论文发表情况 | 第140-141页 |
| 致谢 | 第141-142页 |
