| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-24页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第12-13页 |
| 1.2 HOXa-10基因的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 HOXa-10基因概述 | 第13-14页 |
| 1.2.2 HOXa-10基因功能研究进展 | 第14-17页 |
| 1.3 孕酮诱导HOXa-10基因表达的研究现状 | 第17页 |
| 1.4 转基因动物研究进展 | 第17-24页 |
| 1.4.1 转基因动物发展简史 | 第17-18页 |
| 1.4.2 转基因动物制作方式 | 第18-21页 |
| 1.4.2.1 原核显微注射法(Pronuclear microinjection) | 第18页 |
| 1.4.2.2 病毒载体法(Retroviruses) | 第18-19页 |
| 1.4.2.3 精子介导法(Sperm-mediated gene transformation) | 第19页 |
| 1.4.2.4 胚胎干细胞介导法(Embryonic stem cell-mediated) | 第19页 |
| 1.4.2.5 体细胞核移植技术(Somatic cell nuclear transfer) | 第19-20页 |
| 1.4.2.6 转座子介导转基因(Transposon-mediated) | 第20页 |
| 1.4.2.7 基因打靶的转基因方法(Gene targeting) | 第20-21页 |
| 1.4.2.8 人类人工染色体法(Human artificial chromosome) | 第21页 |
| 1.4.2.9 锌指核酸酶介导转基因(Zinc finger nuclease-mediated) | 第21页 |
| 1.4.3 转基因动物的检测方法 | 第21-23页 |
| 1.4.3.1 基因染色体水平的检测 | 第21-22页 |
| 1.4.3.2 转录水平的检测 | 第22-23页 |
| 1.4.3.3 翻译水平的检测 | 第23页 |
| 1.4.3.4 表型水平的检测 | 第23页 |
| 1.4.4 转基因动物育种研究的意义 | 第23-24页 |
| 2 研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 3 材料与方法 | 第25-39页 |
| 3.1 材料 | 第25-30页 |
| 3.1.1 实验样品 | 第25-26页 |
| 3.1.1.1 用于HOXa-10基因孕酮诱导表达的样品 | 第25页 |
| 3.1.1.2 用于转基因猪制备及检测的样品 | 第25-26页 |
| 3.1.2 主要试剂及配制 | 第26-29页 |
| 3.1.2.1 引物 | 第26页 |
| 3.1.2.2 孕酮注射所需主要试剂 | 第26页 |
| 3.1.2.3 转基因猪制备所需主要试剂及配置 | 第26-27页 |
| 3.1.2.4 转基因猪检测所需主要试剂及配置 | 第27-29页 |
| 3.1.2.5 其他常规试剂与药品 | 第29页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 3.2 方法 | 第30-39页 |
| 3.2.1 研究技术路线 | 第30-31页 |
| 3.2.1.1 小鼠孕酮注射后子宫内膜HOXa-10基因表达 | 第30-31页 |
| 3.2.1.2 转HOXa-10基因猪的制备与检测 | 第31页 |
| 3.2.2 小鼠孕酮注射 | 第31-33页 |
| 3.2.2.1 样品准备 | 第31-32页 |
| 3.2.2.2 小鼠子宫内膜RNA提取 | 第32页 |
| 3.2.2.3 总RNA的反转录 | 第32-33页 |
| 3.2.2.4 实时定量PCR | 第33页 |
| 3.2.3 转基因猪制备 | 第33-36页 |
| 3.2.3.1 实验用猪的筛选 | 第33-34页 |
| 3.2.3.2 母猪的超数排卵 | 第34页 |
| 3.2.3.3 原核胚胎的获取 | 第34-35页 |
| 3.2.3.4 显微注射 | 第35页 |
| 3.2.3.5 受体母猪手术移植 | 第35页 |
| 3.2.3.6 妊娠产仔 | 第35-36页 |
| 3.2.4 转基因猪检测 | 第36-39页 |
| 3.2.4.1 样品采集 | 第36页 |
| 3.2.4.2 猪总DNA提取 | 第36页 |
| 3.2.4.3 PCR检测 | 第36-37页 |
| 3.2.4.4 Southern杂交 | 第37-39页 |
| 4 结果 | 第39-44页 |
| 4.1 小鼠孕酮注射诱导子宫内膜HOXa-10基因的表达 | 第39-41页 |
| 4.1.1 小鼠子宫内膜RNA的提取 | 第39页 |
| 4.1.2 小鼠子宫内膜RNA的反转录 | 第39-40页 |
| 4.1.3 小鼠HOXa10基因定量PCR检测结果 | 第40-41页 |
| 4.2 转基因猪制备 | 第41页 |
| 4.3 转基因猪检测 | 第41-44页 |
| 4.3.1 转基因猪PCR初步鉴定 | 第41-42页 |
| 4.3.2 转基因猪的Southern blot鉴定 | 第42-44页 |
| 5 讨论 | 第44-48页 |
| 5.1 关于小鼠孕酮注射后子宫内膜HOXa-10基因表达变化情况 | 第44-45页 |
| 5.1.1 孕酮对HOXa-10调控机制 | 第44页 |
| 5.1.2 HOXa-10表达调控机理 | 第44-45页 |
| 5.2 转HOXa-10基因猪的制备 | 第45-46页 |
| 5.2.1 转HOXa-10基因的意义 | 第45页 |
| 5.2.2 转基因方法与效率 | 第45-46页 |
| 5.2.3 转HOXa-10基因与猪繁殖性状的改良 | 第46页 |
| 5.3 转HOXa-10基因猪的鉴定 | 第46-48页 |
| 5.3.1 转基因鉴定的方法选择 | 第46-47页 |
| 5.3.2 转基因鉴定与安全 | 第47页 |
| 5.3.3 转HOXa-10基因前景与挑战 | 第47-48页 |
| 6 小结 | 第48-50页 |
| 6.1 本研究的主要成果与结论 | 第48页 |
| 6.2 本研究的创新点与特色 | 第48页 |
| 6.3 本研究的不足及下一步工作建议 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
