| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 引言 | 第10-15页 |
| 1.1 pp-GalNAc-Ts 家族 | 第10-12页 |
| 1.2 GalNAc-T14 | 第12-13页 |
| 1.3 GalNAc-T14 与IGFBP-3 的关系 | 第13-14页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第14-15页 |
| 第2章 GalNAc-T14 多抗制备及组织表达 | 第15-33页 |
| 2.1 材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 菌种和载体 | 第15页 |
| 2.1.2 培养基 | 第15页 |
| 2.1.3 主要试剂和缓冲液 | 第15-17页 |
| 2.2 主要实验器材 | 第17-18页 |
| 2.3 方法 | 第18-27页 |
| 2.3.1 pET-DsbA/GalNAc-T14 原核表达载体的构建 | 第18-22页 |
| 2.3.2 GalNAc-T14 融合蛋白的诱导表达 | 第22-23页 |
| 2.3.3 GalNAc-T14 的纯化与定量 | 第23-25页 |
| 2.3.4 多克隆抗体的制备与滴度测定 | 第25-26页 |
| 2.3.5 免疫印迹检测GalNAc-T14 多抗的特异性及在不同组织的表达情况 | 第26-27页 |
| 2.4 结果 | 第27-31页 |
| 2.4.1 GalNAc-T14 原核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.4.2 重组融合GalNAc-T14 的诱导表达 | 第28-29页 |
| 2.4.3 重组融合GalNAc-T14 的纯化 | 第29页 |
| 2.4.4 抗GalNAc-T14 多克隆抗体免疫扩散检测 | 第29-30页 |
| 2.4.5 抗GalNAc-T14 多克隆抗体特异性鉴定 | 第30页 |
| 2.4.6 GalNAc-T14 在肿瘤组织及癌旁正常组织的表达 | 第30-31页 |
| 2.5 讨论 | 第31-33页 |
| 第3章 GalNAc-T14 与IGFBP-3 共定位 | 第33-40页 |
| 3.1 材料 | 第33页 |
| 3.1.1 菌种和载体 | 第33页 |
| 3.1.2 培养基 | 第33页 |
| 3.1.3 主要试剂和缓冲液 | 第33页 |
| 3.2 主要实验器材 | 第33-34页 |
| 3.3 方法 | 第34-36页 |
| 3.3.1 pEGFP-C1/GalNAc-T14 真核表达载体的构建 | 第34页 |
| 3.3.2 pCMV/IGFBP-3 真核表达载体的构建 | 第34页 |
| 3.3.3 GalNAc-T14 与IGFBP-3 共转染MCF-7 细胞 | 第34-35页 |
| 3.3.4 免疫荧光 | 第35-36页 |
| 3.4 结果 | 第36-38页 |
| 3.4.1 GalNAc-T14 真核表达载体的构建 | 第36页 |
| 3.4.2 IGFBP-3 真核表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.4.3 激光共聚焦显微镜检测GalNAc-T14 与IGFBP-3 的定位 | 第37-38页 |
| 3.5 讨论 | 第38-40页 |
| 第4章 GalNAc-T14 在果蝇S2 细胞系的表达 | 第40-44页 |
| 4.1 材料 | 第40页 |
| 4.1.1 菌种和载体 | 第40页 |
| 4.1.2 培养基 | 第40页 |
| 4.1.3 主要试剂和缓冲液 | 第40页 |
| 4.2 方法 | 第40-42页 |
| 4.2.1 pMT/BIP/V5-HIS C/GalNAc-T14 真核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 4.2.2 GalNAc-T14 转染果蝇S2 细胞 | 第41-42页 |
| 4.2.3 GalNAc-T14 融合蛋白的诱导表达 | 第42页 |
| 4.2.4 免疫印迹检测 | 第42页 |
| 4.3 结果 | 第42-43页 |
| 4.3.1 GalNAc-T14 真核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 4.3.2 重组融合GalNAc-T14 的诱导表达 | 第43页 |
| 4.4 讨论 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
