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幽门螺杆菌CagA/UreB口服减毒沙门氏菌活载体疫苗的研究

摘要第9-12页
Abstract第12-14页
第一部分 幽门螺杆菌疫苗的研究进展第15-42页
    1 幽门螺杆菌的病理损伤机制第15-21页
        1.1 幽门螺杆菌的生物学特性第15-16页
        1.2 幽门螺杆菌的感染途径第16-17页
        1.3 幽门螺杆菌的毒力基因第17-21页
            1.3.1 幽门螺杆菌尿素酶(urease)第18页
            1.3.2 细胞毒素相关抗原(CagA)第18-19页
            1.3.3 空泡毒素基因(VacA)第19-20页
            1.3.4 iceA基因第20-21页
    2 幽门螺杆菌的治疗第21-24页
        2.1 幽门螺杆菌的化学药物治疗第21-22页
        2.2 免疫抗体治疗幽门螺杆菌第22-24页
        2.3 影响幽门螺杆菌治疗的因素第24页
    3 幽门螺杆菌感染动物模型第24-30页
        3.1 H. pylori类似菌的自然感染情况第24-25页
        3.2 H. pylori感染的动物模型第25-28页
        3.3 动物模型的应用第28-30页
            3.3.1 动物模型在抗H. pylori治疗方法和疗效研究进展第28-29页
            3.3.2 动物模型在研究H. pylori致病机理方面的应用第29-30页
            3.3.3 动物模型在研究H. pylori疫苗中的应用第30页
    4 幽门螺杆菌疫苗免疫机制及其研究进展第30-40页
        4.1 幽门螺杆菌自然感染的免疫反应第31-32页
        4.2 幽门螺杆菌疫苗类型的研究进展第32-39页
            4.2.1 全菌蛋白疫苗第32-33页
            4.2.2 基因工程疫苗第33-37页
            4.2.3 载体疫苗第37-39页
        4.3 国内外幽门螺杆菌疫苗研究的现状第39-40页
    5 研究目的和意义第40-42页
        5.1 本研究的目的第40-41页
        5.2 本研究的意义第41-42页
第二部分 实验研究第42-89页
    实验研究一 幽门螺杆菌全菌蛋白疫苗免疫奶牛第42-49页
        引言第42-43页
        1 材料与方法第43-44页
            1.1 材料第43页
                1.1.1 菌株第43页
                1.1.2 试剂第43页
                1.1.3 试验动物第43页
            1.2 方法第43-44页
                1.2.1 疫苗准备第43页
                1.2.2 免疫、采样第43-44页
                1.2.3 血清/乳汁中IgG检测第44页
        2 数据分析第44-45页
        3 结果与分析第45-46页
            3.1 奶牛的血清中和牛奶中幽门螺杆菌抗体的动态变化规律第45页
            3.2 免疫后奶牛身体状况第45-46页
        4 讨论第46-49页
            4.1 疫苗的免疫途径第46-47页
            4.2 免疫乳的应用第47-49页
    实验研究二 幽门螺杆菌UreB/CagA双价口服减毒沙门氏菌活载体疫苗的构建第49-65页
        引言第49-50页
        1 材料与方法第50-56页
            1.1 材料第50页
                1.1.1 菌株与质粒第50页
                1.1.2 主要试剂第50页
                1.1.3 主要仪器第50页
                1.1.4 主要培养基第50页
            1.2 方法第50-56页
                1.2.1 幽门螺杆菌的培养第50-51页
                1.2.2 感受态细菌的制备第51-52页
                1.2.3 引物设计及PCR反应体系第52页
                1.2.4 目的基因CagA和UreB分别与T载体(pMD-18T)的连接、转化第52-53页
                1.2.5 转化的质粒提取鉴定第53页
                1.2.6 pYA3493质粒提取,酶切第53-54页
                1.2.7 表达Hp-UreB和Hp-CagA的重组减毒猪霍乱沙门菌疫苗的建立第54-55页
                1.2.8 重组蛋白的表达及鉴定第55-56页
        2 结果与分析第56-61页
            2.1 Hp-UreB和Hp-CagA基因片段的扩增第56-58页
            2.2 酶切鉴定和和PCR鉴定第58-60页
            2.3 重组蛋白的表达及鉴定第60-61页
        3 讨论第61-65页
            3.1 基因的选择第61-62页
            3.2 口服疫苗载体的选择第62-65页
    实验研究三 幽门螺杆菌CagA/UreB沙门氏菌活载体疫苗免疫小鼠的研究第65-74页
        1 材料和方法第65-68页
            1.1 材料第65-66页
                1.1.1 实验动物第65页
                1.1.2 菌株第65页
                1.1.3 主要试剂第65-66页
                1.1.4 主要仪器第66页
                1.1.5 各种培养基第66页
            1.2 方法第66-68页
                1.2.1 疫苗准备第66页
                1.2.2 免疫、采样第66-67页
                1.2.3 幽门螺杆菌特异抗体IgG检测(ELISA)第67-68页
                1.2.4 组织切片和免疫组化第68页
        2 数据分析第68页
        3 结果与分析第68-72页
            3.1 血清中抗体分析第68-69页
            3.2 组织切片和免疫组化第69-71页
            3.3 不同组织中幽门螺杆菌SS1菌落数第71-72页
        4 讨论第72-74页
    实验四 幽门螺杆菌CagA/UreB真核荧光载体的构建及胃黏膜上皮细胞GES-1转染的研究第74-89页
        引言第74页
        1 材料与方法第74-80页
            1.1 材料第74-75页
                1.1.1 菌株与质粒第74页
                1.1.2 主要试剂第74-75页
                1.1.3 主要仪器第75页
                1.1.4 各种培养基第75页
            1.2 方法第75-80页
                1.2.1 幽门螺杆菌的培养第75页
                1.2.2 引物设计及PCR反应体系第75-76页
                1.2.3 目的基因CagA和UreB分别与T载体(pMD-18T)的连接、转化第76页
                1.2.4 转化的质粒提取鉴定第76-77页
                1.2.5 质粒pEGFP-N1提取、酶切第77页
                1.2.6 表达Hp-UreB和Hp-CagA的重组质粒的构建第77-78页
                1.2.7 质粒大量提取第78-79页
                1.2.8 提纯质粒转染GES-1细胞第79页
                1.2.9 细胞凋亡的检测第79页
                1.2.10 电镜观察第79-80页
        2 数据分析第80页
        3 结果与分析第80-86页
            3.1 Hp-UreB和Hp-CagA基因片段的扩增第80-81页
            3.2 UreB与pEGFP-N1连接以及酶切结果第81页
            3.3 细胞转染第81-82页
            3.4 细胞凋亡的检测第82-84页
            3.5 透射电镜观察第84-86页
        4 讨论第86-89页
第三部分 参考文献第89-108页
第四部分 全文结论和创新点第108-110页
    结论第108-109页
    创新点第109-110页
附录Ⅰ 在读期间发表的学术论文第110页
附录II 参加的学术活动第110-111页
致谢第111页

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