| 缩略语表 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 文献回顾 | 第19-29页 |
| 第一部分 Ran 在胰腺癌组织及细胞中的表达及其与胰腺癌预后的关系 | 第29-38页 |
| 引言 | 第29页 |
| 1 材料 | 第29-31页 |
| 1.1 细胞株 | 第29页 |
| 1.2 胰腺癌组织标本 | 第29-30页 |
| 1.3 主要试剂 | 第30-31页 |
| 1.4 主要仪器 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-34页 |
| 2.1 细胞培养 | 第31-32页 |
| 2.2 免疫组织化学染色 | 第32-33页 |
| 2.2.1 免疫组织化学染色步骤 | 第32页 |
| 2.2.2 免疫组织化学评分标准 | 第32-33页 |
| 2.2.3 统计学分析 | 第33页 |
| 2.3 Western blot 检测各胰腺癌细胞系中 Ran 的表达情况 | 第33-34页 |
| 2.3.1 细胞全蛋白样品的制备 | 第33页 |
| 2.3.2 SDS-PAGE 和 Western blot | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-36页 |
| 3.1 Ran 在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达 | 第34-35页 |
| 3.2 Ran 的表达与胰腺癌临床病理参数的关系 | 第35-36页 |
| 3.3 利用 Western blot 检测 Ran 在不同胰腺癌细胞系中的表达情况 | 第36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 第二部分 Ran 对胰腺癌细胞增殖能力的影响 | 第38-52页 |
| 引言 | 第38页 |
| 1 材料 | 第38-40页 |
| 1.1 细胞株 | 第38页 |
| 1.2 Oligo siRNA-Ran-RiboTM | 第38-39页 |
| 1.3 慢病毒包装 | 第39页 |
| 1.4 主要试剂 | 第39-40页 |
| 1.5 实验动物 | 第40页 |
| 1.6 主要仪器 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-44页 |
| 2.1 细胞培养 | 第40-41页 |
| 2.2 siRNA 瞬时转染及干扰目的蛋白效果检验 | 第41-42页 |
| 2.2.1 瞬时转染的步骤 | 第41页 |
| 2.2.2 利用 Western blot 检验各干扰片段在蛋白水平的干扰效率 | 第41页 |
| 2.2.3 利用 qRT-PCR 检验各干扰片段在 mRNA 水平的干扰效率 | 第41-42页 |
| 2.3 慢病毒感染细胞系 | 第42页 |
| 2.4 MTT 实验 | 第42-43页 |
| 2.5 平板克隆形成实验 | 第43页 |
| 2.6 流式细胞术检测细胞周期 | 第43-44页 |
| 2.7 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第44页 |
| 2.8 裸鼠成瘤实验 | 第44页 |
| 2.9 统计学分析 | 第44页 |
| 3 结果 | 第44-50页 |
| 3.1 Oligo Ran siRNA 瞬时转染细胞效果的鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2 慢病毒载体携带 Ran 干扰片段感染细胞效果的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3 MTT 结果 | 第46-47页 |
| 3.4 平板克隆形成实验结果 | 第47-48页 |
| 3.5 流式细胞术检测细胞周期的结果 | 第48-49页 |
| 3.6 流式细胞术检测细胞凋亡的结果 | 第49-50页 |
| 3.7 裸鼠成瘤实验结果 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 第三部分 Ran 对胰腺癌细胞转移能力的影响 | 第52-59页 |
| 引言 | 第52页 |
| 1 材料 | 第52-53页 |
| 1.1 细胞株 | 第52页 |
| 1.2 主要试剂 | 第52-53页 |
| 1.3 实验动物 | 第53页 |
| 1.4 主要仪器 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-54页 |
| 2.1 细胞培养 | 第53页 |
| 2.2 Transwell 法检测细胞侵袭能力 | 第53页 |
| 2.3 Transwell 法检测细胞迁移能力 | 第53-54页 |
| 2.4 细胞刮擦实验 | 第54页 |
| 2.5 裸鼠尾静脉转移实验 | 第54页 |
| 2.6 统计学分析 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-57页 |
| 3.1 Transwell 检测 Ran 对胰腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响 | 第54-56页 |
| 3.2 细胞刮擦实验检测 Ran 对胰腺癌细胞迁移能力的影响 | 第56-57页 |
| 3.4 裸鼠尾静脉转移实验检测 Ran 对胰腺癌细胞体内转移能力的影响 | 第57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 第四部分 Ran 促进胰腺癌细胞增殖及转移的机制研究 | 第59-68页 |
| 引言 | 第59页 |
| 1 材料 | 第59-61页 |
| 1.1 细胞株 | 第59页 |
| 1.2 高通量 PCR 芯片 | 第59-60页 |
| 1.3 主要试剂 | 第60页 |
| 1.4 主要仪器 | 第60-61页 |
| 2 方法 | 第61-62页 |
| 2.1 细胞培养 | 第61页 |
| 2.2 Western blot 验证各分子表达情况 | 第61页 |
| 2.3 PCR 芯片分析 | 第61-62页 |
| 3 结果 | 第62-66页 |
| 3.1 Western blot 检测细胞周期及凋亡相关分子在各细胞系中的表达情况 | 第62-64页 |
| 3.2 PCR 芯片分析结果 | 第64-66页 |
| 3.2.1 RNA 样品质检结果 | 第64页 |
| 3.2.2 芯片结果 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 附录 | 第74页 |
