| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第9-23页 |
| 1.1 核酸适配体简介 | 第9页 |
| 1.2 SELEX 技术及其基本原理 | 第9-11页 |
| 1.3 核酸适配体的筛选方法 | 第11-15页 |
| 1.3.1 基于毛细管电泳的 SELEX(CE-SELEX) | 第12页 |
| 1.3.2 硝酸纤维素膜作为分离介质的筛选 | 第12页 |
| 1.3.3 基于亲和色谱和磁珠的筛选 | 第12-13页 |
| 1.3.4 基于 FACS (Fluorescence-Activated Cell Sorting)的体外筛选 | 第13-14页 |
| 1.3.5 基于微流控芯片的筛选 | 第14-15页 |
| 1.4 核酸适配体的特征以及在生物医学领域的应用 | 第15-20页 |
| 1.4.1 核酸适配体的特征 | 第15-16页 |
| 1.4.2 核酸适配体在生物医学领域的应用 | 第16-20页 |
| 1.5 转录因子 FOXM1 概述 | 第20-21页 |
| 1.6 本论文拟开展的研究工作 | 第21-23页 |
| 第2章 GST-FOXM1 DBD 融合蛋白及 GST 蛋白的原核表达与纯化 | 第23-34页 |
| 2.1 前言 | 第23-24页 |
| 2.2 实验仪器与材料 | 第24-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-31页 |
| 2.3.1 pGEX-4T-1-FOXM1(220-355 aa)重组质粒的鉴定 | 第26-28页 |
| 2.3.2 GST-FOXM1DBD 融合蛋白与 GST 蛋白的表达、提取与纯化 | 第28-31页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第31-33页 |
| 2.4.1 重组质粒 pGEX-4T-1- FOXM1(220-355 aa)的鉴定和转化 | 第31-32页 |
| 2.4.2 GST-FOXM1DBD 融合蛋白与 GST 蛋白的表达、提取与纯化 | 第32-33页 |
| 2.5 本章小结 | 第33-34页 |
| 第3章 转录因子 FOXM1 DBD 核酸适配体的筛选 | 第34-43页 |
| 3.1 前言 | 第34-35页 |
| 3.2 实验仪器和材料 | 第35-36页 |
| 3.3 实验方法 | 第36-39页 |
| 3.3.1 FOXM1 DBD 蛋白核酸适配体的筛选 | 第36-38页 |
| 3.3.2 荧光显微镜法检测库的富集情况 | 第38页 |
| 3.3.3 连接、转化、克隆和测序 | 第38-39页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第39-42页 |
| 3.4.1 筛选过程最佳循环数的确定 | 第39-40页 |
| 3.4.2 富集情况的检测 | 第40-41页 |
| 3.4.3 克隆与测序结果 | 第41-42页 |
| 3.5 本章小结 | 第42-43页 |
| 第4章 核酸适配体 JX42 对转录因子 FOXM1 识别的初步研究 | 第43-52页 |
| 4.1 前言 | 第43-44页 |
| 4.2 实验仪器和材料 | 第44页 |
| 4.3 实验方法 | 第44-48页 |
| 4.3.1 适配体 JX42 与 FOXM1-DBD 结合亲和力的考察 | 第44-46页 |
| 4.3.2 适配体 JX42 与 FOXM1 结合特异性的考察 | 第46页 |
| 4.3.3 231 细胞“免疫”荧光染色 | 第46-48页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第48-50页 |
| 4.4.1 适配体 JX42 与 GST-FOXM1-DBD 的解离平衡常数值的测定 | 第48页 |
| 4.4.2 适配体 JX42 与纯蛋白 GST-FOXM1-DBD 结合亲和力和特异性检测 | 第48-49页 |
| 4.4.3 适配体 JX42 与细胞裂解物中 FOXM1 结合的亲和力和特异性的检测 | 第49页 |
| 4.4.4 231 细胞“免疫”荧光染色 | 第49-50页 |
| 4.5 本章小结 | 第50-52页 |
| 结论与展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录 A 攻读学位期间所发表的学术论文 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
