| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第12-26页 |
| 1. 茧蜂病毒对寄主免疫抑制的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1 昆虫的免疫反应 | 第12-14页 |
| 1.1.1 细胞免疫 | 第12页 |
| 1.1.2 体液免疫 | 第12-13页 |
| 1.1.3 黑化反应 | 第13-14页 |
| 1.2 茧蜂病毒对寄主的免疫抑制 | 第14-16页 |
| 1.2.1 茧蜂病毒研究简述 | 第14-15页 |
| 1.2.2 茧蜂病毒抑制宿主免疫反应 | 第15-16页 |
| 2. 蛋白酪氨酸磷酸酯酶(PTP)在免疫反应中的功能 | 第16-19页 |
| 2.1 哺乳动物中的PTP研究进展 | 第16-18页 |
| 2.1.1 PTP与磷酸化调控 | 第16-17页 |
| 2.1.2 PTP与免疫反应的关系 | 第17-18页 |
| 2.2 昆虫PTP的研究进展 | 第18页 |
| 2.3 茧蜂病毒中的PTP | 第18-19页 |
| 3. Vank在免疫反应中的功能 | 第19-23页 |
| 3.1 哺乳动物中ANK的研究进展 | 第19-20页 |
| 3.1.1 ANK结构域与蛋白相互关系 | 第19-20页 |
| 3.1.2 ANK结构域与NF-κB信号通路 | 第20页 |
| 3.2 昆虫中ANK的研究进展 | 第20-21页 |
| 3.3 茧蜂病毒中的ANK-Vank | 第21-23页 |
| 4. 假说的提出 | 第23-25页 |
| 5. 本研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 材料与方法 | 第26-50页 |
| 1. 材料 | 第26-30页 |
| 1.1 斜纹夜蛾 | 第26页 |
| 1.2 双斑侧沟茧蜂Microplitis bicoloratus | 第26页 |
| 1.3 昆虫细胞 | 第26-27页 |
| 1.4 质粒载体和感受态细胞 | 第27页 |
| 1.5 分子克隆相关试剂 | 第27页 |
| 1.6 实时荧光定量PCR相关试剂 | 第27页 |
| 1.7 蛋白提取及Western blot相关试剂 | 第27-28页 |
| 1.8 其他主要试剂 | 第28页 |
| 1.9 培养基 | 第28-29页 |
| 1.10 缓冲液 | 第29页 |
| 1.11 主要设备 | 第29-30页 |
| 2. 方法 | 第30-50页 |
| 2.1 茧蜂病毒的提取及扩增 | 第30-31页 |
| 2.1.1 需准备的试剂 | 第30页 |
| 2.1.2 病毒DNA提取 | 第30页 |
| 2.1.3 病毒环状DNA的扩增 | 第30-31页 |
| 2.2 RNA提取及反转录 | 第31-32页 |
| 2.2.1 不同样品的处理 | 第31页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.3 将RNA逆转录为cDNA | 第32页 |
| 2.3 基因的克隆及重组T载体的构建 | 第32-37页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第32-33页 |
| 2.3.2 ptps和vanks基因的扩增 | 第33-34页 |
| 2.3.3 ptps和vanks基因的回收和纯化 | 第34-35页 |
| 2.3.4 ptps和vanks基因与pMD19-T Vector的连接 | 第35页 |
| 2.3.5 重组质粒转化 | 第35-36页 |
| 2.3.6 阳性克隆菌株筛选与鉴定 | 第36-37页 |
| 2.4 质粒提取 | 第37页 |
| 2.5 带酶切位点的T载体构建 | 第37-38页 |
| 2.6 真核表达载体的构建 | 第38-42页 |
| 2.6.1 pIZT/V5-His真核表达载体构建策略 | 第38-39页 |
| 2.6.2 质粒的双酶切 | 第39-40页 |
| 2.6.3 酶切产物的回收 | 第40页 |
| 2.6.4 目的基因与表达载体的连接 | 第40-42页 |
| 2.7 昆虫细胞的转染 | 第42页 |
| 2.8 免疫印迹Western blot | 第42-44页 |
| 2.8.1 细胞总蛋白的提取 | 第42页 |
| 2.8.2 蛋白浓度测定及变性 | 第42-43页 |
| 2.8.3 SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 | 第43-44页 |
| 2.8.4 转膜及后续操作 | 第44页 |
| 2.9 MbBV感染Spli221 | 第44-45页 |
| 2.10 免疫荧光定位实验 | 第45页 |
| 2.11 Quantitative Real-time PCR(qRT-PCR) | 第45-47页 |
| 2.12 转录组数据分析 | 第47页 |
| 2.13 系统进化树构建 | 第47-50页 |
| 结果 | 第50-89页 |
| 1 | 第50-65页 |
| 1.1 MbBV中的ptp和vank基因 | 第50-60页 |
| 1.1.1 ptps和vanks在寄主中的表达 | 第50-52页 |
| 1.1.3 ptps基因的克隆 | 第52-57页 |
| 1.1.4 幼虫被寄生第6天后检测到ptp4和ptp109 | 第57-59页 |
| 1.1.5 vanks基因的克隆 | 第59-60页 |
| 1.2 MbBV导致Spli221细胞异常 | 第60-62页 |
| 1.3 PTP109含有去磷酸化结构域ptp-c和DSP-c | 第62-65页 |
| 1.3.1 MbBV-ptps在进化上表现出复杂的特性 | 第62-63页 |
| 1.3.2 PTP109中含有ptp-c和DSP-c催化结构域 | 第63-65页 |
| 2. PTP109和Vanks对昆虫细胞免疫的影响 | 第65-77页 |
| 2.1 PTP109导致High Five细胞产生类凋亡小体 | 第65-71页 |
| 2.1.1 ptp109和ptp4真表达载体的构建 | 第65-66页 |
| 2.1.2 vank86和vank92真表达载体pIZT/V5-His的构建 | 第66-68页 |
| 2.1.3 ptp109和vanks基因的真核表达 | 第68-70页 |
| 2.1.4 过表达PTP109导致High Five细胞产生类凋亡小体 | 第70-71页 |
| 2.2 Vank86导致High Five细胞骨架异常 | 第71-73页 |
| 2.3 Vanks导致Spli221细胞形态异常 | 第73-74页 |
| 2.4 PTP109诱导寄主细胞产生Caspase-3激活型条带 | 第74-75页 |
| 2.5 PTP109抑制PI3K/Akt信号通路 | 第75-77页 |
| 3. PTP109和Vanks抑制斜纹夜蛾细胞的体液免疫 | 第77-89页 |
| 3.1 寄生后斜纹夜蛾幼虫血淋巴中参与免疫的基因被下调 | 第77-81页 |
| 3.1.1 斜纹夜蛾幼虫血淋巴转录组数据 | 第77-79页 |
| 3.1.2 斜纹夜蛾中的attacin、defensin和ppA3 | 第79-81页 |
| 3.2 抗菌肽attacin在幼虫被寄生后1-7天的变化 | 第81-82页 |
| 3.3 防御素defensin在幼虫寄生后1-7天的变化 | 第82-84页 |
| 3.4 酚氧化酶原激活酶ppA3在幼虫寄生后1-7天的变化 | 第84-85页 |
| 3.5 PTP109、Vank86和Vank92对attacin、defensin和ppA3的影响 | 第85-89页 |
| 3.5.1 Vank86和Vank92抑制抗菌肽attacin上调 | 第86-87页 |
| 3.5.2 PTP109、Vank86和Vank92抑制防御素defensin上调 | 第87-88页 |
| 3.5.3 PTP109、Vank86和Vank92抑制酚氧化酶原激活酶ppA3上调 | 第88-89页 |
| 讨论 | 第89-93页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 1. PTP109和PI3K/Akt信号通路有关 | 第93页 |
| 2. PTP109、Vank86和Vank92共同影响NF-κB信号通路介导的免疫反应 | 第93页 |
| 3. PTP109、Vank86和Vank92定位于细胞质和细胞核中 | 第93-94页 |
| 对下一步工作的建议 | 第94-95页 |
| 本研究的创新之处 | 第95-96页 |
| 附录 | 第96-126页 |
| 附录1 基因克隆及其测序结果 | 第96-107页 |
| 1.1 CypD的克隆 | 第96页 |
| 1.2 重组pMD19-T-CypD测序结果 | 第96-97页 |
| 1.3 MbBV-ptp3的克隆 | 第97-98页 |
| 1.4 重组pMD19-T-ptp3测序结果 | 第98-100页 |
| 1.5 文中所克隆基因的测序比对结果 | 第100-107页 |
| 附录2 斜纹夜蛾FoF1-ATPaseβ-chain相关工作 | 第107-111页 |
| 2.1 自制Anti-FoF1-ATPaseβ抗体检测 | 第107页 |
| 2.2 斜纹夜蛾幼虫寄生后4-7天FoF1-ATPaseβ蛋白水平的变化 | 第107-108页 |
| 2.3 PDV感染Spli221细胞后FoF1-ATPaseβ蛋白水平的变化 | 第108-109页 |
| 2.4 Si-RNA沉默FoF1-ATPasep | 第109-110页 |
| 2.5 FoF1-ATPaseβ与inx2和inx3共转染 | 第110-111页 |
| 附录3 文中所用引物设计 | 第111-121页 |
| 3.1 ptp66引物 | 第111页 |
| 3.2 ptp4引物 | 第111-112页 |
| 3.3 ptp109引物 | 第112-114页 |
| 3.4 pp113引物 | 第114-115页 |
| 3.5 带酶切位点的E-ptp109引物设计 | 第115-117页 |
| 3.6 带酶切位点的E-ptp4引物 | 第117-121页 |
| 附录4 有关基因序列 | 第121-126页 |
| 参考文献 | 第126-135页 |
| 在读期间发表文章及获奖情况 | 第135-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
