| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第9-15页 |
| 1、Sabin株脊髓灰质炎疫苗毒种遗传稳定性研究的意义及进展 | 第9-12页 |
| 2、Sabin株病毒深度测序的意义及现状 | 第12-15页 |
| 一、实验材料和实验方法 | 第15-40页 |
| (一) 材料和仪器设备 | 第15-18页 |
| 1、细胞 | 第15页 |
| 2、脊灰病毒毒种 | 第15-16页 |
| 3、试剂和器材 | 第16-17页 |
| 4、主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 5、查询使用的主要生物信息学工具 | 第18页 |
| (二) 实验方法 | 第18-40页 |
| 1、细胞培养 | 第18-19页 |
| 2、病毒培养 | 第19-20页 |
| 3、病毒滴度的检测 | 第20页 |
| 4、ELISA法测定D抗原含量 | 第20-22页 |
| 5、病毒RNA提取 | 第22-24页 |
| 6、Sanger测序引物设计及合成 | 第24-26页 |
| 7、Sanger测序RT-PCR | 第26-29页 |
| 8、高保真酶DNA扩增 | 第29-31页 |
| 9、Sanger测序病毒基因序列的分析 | 第31页 |
| 10、NGS样品的预处理方法 | 第31-32页 |
| 11、NGS模板的扩增方法 | 第32-35页 |
| 12、NGS模板纯化方法 | 第35-36页 |
| 13、NGS模板定量 | 第36-38页 |
| 14、NGS模板质量鉴定 | 第38-40页 |
| 二、实验结果 | 第40-57页 |
| (一) sIPV毒种遗传稳定性研究结果 | 第40-45页 |
| 1、不同代次Sabin株的病毒滴度和D抗原含量 | 第40页 |
| 2、RNA提取结果 | 第40-41页 |
| 3、Sanger测序RT-PCR产物电泳检测结果 | 第41-42页 |
| 4、Sanger测序全基因序列比对结果 | 第42-45页 |
| (二) Sabin株病毒深度测序模板制备方法探索结果 | 第45-57页 |
| 1、RNA提取后是否进行DNase Ⅰ消化电泳检测结果 | 第45-46页 |
| 2、NGS模板扩增方法的优化结果 | 第46-48页 |
| 3、NGS模板制备的RT-PCR产物鉴定结果 | 第48-49页 |
| 4、磁珠纯化产物的电泳检测、定量及质量鉴定结果 | 第49-56页 |
| 5、制备模板的完整性检测结果 | 第56-57页 |
| 三、讨论 | 第57-66页 |
| (一) sIPV毒种遗传稳定性研究 | 第57-59页 |
| 1、sIPV毒种全基因组测序分析 | 第57-58页 |
| 2、sIPV毒种感染性滴度和D抗原含量 | 第58页 |
| 3、小结 | 第58-59页 |
| (二) Sabin株深度测序模板制备方法探索 | 第59-64页 |
| 1、Sabin株病毒NGS样品的预处理 | 第59页 |
| 2、Sabin株病毒NGS模板扩增方法 | 第59-61页 |
| 3、Sabin株病毒NGS模板纯化方法 | 第61-62页 |
| 4、Sabin株病毒NGS模板定量 | 第62-63页 |
| 5、Sabin株病毒NGS模板质量鉴定 | 第63-64页 |
| 6、小结 | 第64页 |
| (三) 结论与展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 附录 | 第71-75页 |
| 附录1 中英文缩略词对照表 | 第71-73页 |
| 附录2 主要试剂的配制 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 研究生简历 | 第76-77页 |
