| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 新烟碱类杀虫剂 | 第11-14页 |
| 1.1.1 新烟碱类杀虫剂对昆虫的毒性效应与作用机制 | 第11-12页 |
| 1.1.2 新烟碱类杀虫剂对非靶标生物的毒性效应 | 第12页 |
| 1.1.3 一种典型新烟碱类杀虫剂—烯啶虫胺 | 第12-14页 |
| 1.2 化学品毒性体外测试方法 | 第14-20页 |
| 1.2.1 动物实验替代方法的发展 | 第14-18页 |
| 1.2.2 干细胞在体外毒性检测中的应用 | 第18-19页 |
| 1.2.3 遗传毒性体外测试方法 | 第19-20页 |
| 1.3 毒性作用模式与毒性作用机制 | 第20-24页 |
| 1.3.1 毒性作用模式 | 第21-22页 |
| 1.3.2 遗传毒性作用机制 | 第22-24页 |
| 1.4 本文主要研究思路 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-35页 |
| 2.1 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.2 实验仪器 | 第26页 |
| 2.3 人骨髓间充质干细胞培养 | 第26-29页 |
| 2.4 细胞增殖检测 | 第29页 |
| 2.5 水溶性甲瓒法(WST-8)检测细胞存活率 | 第29页 |
| 2.6 鼠肝微粒体酶(S9)体外活化系统制备 | 第29页 |
| 2.7 细胞暴露 | 第29-30页 |
| 2.8 微核实验 | 第30页 |
| 2.9 Annexin V-FITC/PI凋亡检测实验 | 第30页 |
| 2.10 氧化应激实验 | 第30-31页 |
| 2.11 hBMSCs诱导成骨分化 | 第31页 |
| 2.12 细胞总RNA提取 | 第31-32页 |
| 2.13 反转录得到cDNA | 第32页 |
| 2.14 Realtime-qPCR检测DNA损伤应答通路关键基因表达 | 第32-34页 |
| 2.15 数据分析 | 第34-35页 |
| 3 遗传毒性测试阳性对照物——甲磺酸甲酯对hBMSCs的毒性 | 第35-44页 |
| 3.1 甲磺酸甲酯对hBMSCs的细胞毒性和遗传毒性 | 第35-38页 |
| 3.1.1 甲磺酸甲酯对hBMSCs的细胞毒性 | 第36页 |
| 3.1.2 甲磺酸甲酯对hBMSCs的遗传毒性 | 第36-38页 |
| 3.2 甲磺酸甲酯对hBMSCs DNA损伤通路关键基因的影响 | 第38-43页 |
| 3.2.1 引物验证 | 第39页 |
| 3.2.2 MMS对hBMSCs的DNA损伤通路关键基因的影响 | 第39-43页 |
| 3.3 小结 | 第43-44页 |
| 4 烯啶虫胺对hBMSCs的遗传毒性效应 | 第44-60页 |
| 4.1 烯啶虫胺对hBMSCs的细胞毒性 | 第44-46页 |
| 4.1.1 烯啶虫胺对hBMSCs的细胞存活率的影响 | 第44-45页 |
| 4.1.2 烯啶虫胺对hBMSCs凋亡率的影响 | 第45-46页 |
| 4.2 烯啶虫胺对hBMSCs的遗传毒性 | 第46-53页 |
| 4.2.1 烯啶虫胺对hBMSCs的遗传毒性 | 第47-48页 |
| 4.2.2 烯啶虫胺经体外活化代谢后对hBMSCs的遗传毒性 | 第48-50页 |
| 4.2.3 农用烯啶虫胺混剂对hBMSCs的遗传毒性 | 第50-53页 |
| 4.3 烯啶虫胺对hBSMCs氧化应激的影响 | 第53-57页 |
| 4.3.1 烯啶虫胺对hBMSCs活性氧的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.2 烯啶虫胺对hBMSCs总抗氧化能力的影响 | 第54-56页 |
| 4.3.3 烯啶虫胺对hBMSCs超氧岐化酶的影响 | 第56-57页 |
| 4.4 烯啶虫胺对hBMSCs的成骨分化的影响 | 第57-59页 |
| 4.5 小结 | 第59-60页 |
| 5 烯啶虫胺对hBMSCs的DNA损伤通路上关键基因表达的影响 | 第60-66页 |
| 5.1 ATM和ATR基因表达变化 | 第60-61页 |
| 5.2 p53和Bax基因表达变化 | 第61-62页 |
| 5.3 p21和Gadd45a基因表达变化 | 第62-63页 |
| 5.4 H2AX基因表达变化 | 第63-65页 |
| 5.5 小结 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 附录A hBMSCs表面分子鉴定 | 第73-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
