| 摘要 | 第3-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 中英文缩略词表 | 第12-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-16页 |
| 第2章 在肺鳞癌组织中Shh配体高表达 | 第16-25页 |
| 2.1 临床队列 | 第16页 |
| 2.1.1 研究对象 | 第16页 |
| 2.1.2 建立随访及临床病理特征数据库 | 第16页 |
| 2.2 实验材料 | 第16-17页 |
| 2.3 实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.4 实验方法 | 第18-21页 |
| 2.4.1 主要试剂配制 | 第18-19页 |
| 2.4.2 组织样本的取材及处理 | 第19页 |
| 2.4.3 制作石蜡切片 | 第19页 |
| 2.4.4 免疫组化实验步骤 | 第19-21页 |
| 2.4.5 统计学方法 | 第21页 |
| 2.5 实验结果 | 第21-25页 |
| 2.5.1 一般资料及临床病理特征 | 第21-23页 |
| 2.5.2 肺鳞癌中Shh配体高表达且Shh高表达显著影响肺鳞癌临床预后 | 第23-25页 |
| 第3章 Shh促进肺鳞癌细胞的侵袭和迁移 | 第25-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 3.1.1 细胞系及质粒 | 第25页 |
| 3.1.2 试剂与耗材 | 第25-26页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-34页 |
| 3.2.1 试剂配置 | 第27页 |
| 3.2.2 细胞培养 | 第27-28页 |
| 3.2.3 脂质体转染 | 第28页 |
| 3.2.4 Flag-N-Shh和对照刺激液的制备 | 第28-29页 |
| 3.2.5 细胞划痕实验 | 第29页 |
| 3.2.6 细胞侵袭实验 | 第29页 |
| 3.2.7 统计学分析 | 第29页 |
| 3.2.8 慢病毒技术构建稳定干扰或过表达Shh细胞系(SK-MES-1、H226) | 第29-32页 |
| 3.2.9 细胞总RNA提取 | 第32-33页 |
| 3.2.10 逆转录实验 | 第33-34页 |
| 3.2.11 Real-timePCR | 第34页 |
| 3.3 实验结果 | 第34-38页 |
| 3.3.1 Shh通过旁分泌方式促进肺鳞癌细胞侵袭和迁移 | 第34-35页 |
| 3.3.2 Shh通过自分泌方式促进肺鳞癌细胞的侵袭和迁移 | 第35-38页 |
| 第4章 GATA6下调Shh配体的表达且抑制肺鳞癌细胞的侵袭迁移 | 第38-47页 |
| 4.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 4.1.1 细胞系及质粒 | 第38页 |
| 4.1.2 主要药品与试剂 | 第38页 |
| 4.1.3 主要实验仪器 | 第38-39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39-43页 |
| 4.2.1 试剂配置 | 第39页 |
| 4.2.2 细胞培养 | 第39页 |
| 4.2.3 脂质体转染 | 第39-40页 |
| 4.2.4 细胞蛋白的提取及定量 | 第40-41页 |
| 4.2.5 WesternBlot实验 | 第41-42页 |
| 4.2.6 细胞总RNA提取 | 第42页 |
| 4.2.7 逆转录实验 | 第42-43页 |
| 4.2.8 Real-timePCR | 第43页 |
| 4.3 实验结果 | 第43-47页 |
| 4.3.1 GATA6特异性地在肺鳞癌组织中低表达 | 第43-44页 |
| 4.3.2 GATA6通过下调Shh表达抑制肺鳞癌细胞的迁移和侵袭 | 第44-47页 |
| 第5章 Shh是GATA6的靶基因 | 第47-55页 |
| 5.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 5.1.1 细胞系及质粒 | 第47页 |
| 5.1.2 主要药品与试剂 | 第47页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第47-48页 |
| 5.2 实验方法 | 第48-52页 |
| 5.2.1 主要试剂的配制 | 第48-50页 |
| 5.2.2 双荧光素报告基因分析实验 | 第50-51页 |
| 5.2.3 染色质免疫共沉淀 | 第51-52页 |
| 5.3 实验结果 | 第52-55页 |
| 5.3.1 GATA6抑制Shh的启动子活性 | 第52-53页 |
| 5.3.2 CHIP分析GATA6靶向Shh启动子区 | 第53-55页 |
| 第6章 讨论 | 第55-58页 |
| 第7章 结论 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第63-64页 |
| 综述 | 第64-77页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
