| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-12页 |
| 1 引言 | 第12-20页 |
| ·HCoV-NL63 的发现 | 第12页 |
| ·HCoV-NL63 基因组结构 | 第12-13页 |
| ·HCoV-NL63 感染与复制 | 第13-14页 |
| ·HCoV-NL63 与细胞受体结合 | 第13-14页 |
| ·HCoV-NL63 转录和复制 | 第14页 |
| ·HCoV-NL63 流行病学特点 | 第14-15页 |
| ·世界性分布 | 第14-15页 |
| ·流行季节 | 第15页 |
| ·混合感染 | 第15页 |
| ·HCoV-NL63 诊断 | 第15-16页 |
| ·反转录PCR 诊断(reversed transcript PCR,RT-PCR) | 第15-16页 |
| ·实时荧光定量PCR 诊断(real-time PCR,RT-PCR) | 第16页 |
| ·酶联免疫吸附法诊断(enzyme-linked Immunosorbent assays,ELISA) | 第16页 |
| ·病毒与宿主抗病毒天然免疫反应的关系 | 第16-19页 |
| ·抗病毒天然免疫反应的概述 | 第16-18页 |
| ·病毒逃逸宿主免疫反应的新途径 | 第18-19页 |
| ·本研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 2 实验(一)：HCoV-NL63 PLP 蛋白酶DUB 活性研究 | 第20-39页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·质粒和细胞 | 第21页 |
| ·设备 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21-22页 |
| ·本实验自己配制试剂 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-30页 |
| ·免疫荧光定位分析 | 第22页 |
| ·HCoV-NL63 PLP1 D1225A 和 PLP2 D1849A 表达载体的构建及鉴定 | 第22-26页 |
| ·细胞栽种 | 第26页 |
| ·细胞转染 | 第26-27页 |
| ·Western Blotting 检测 | 第27-30页 |
| ·结果 | 第30-37页 |
| ·HCoV-NL63 PLP1 和 PLP2 的定位 | 第30-31页 |
| ·HCoV-NL63 PLP1 D1225A 和 PLP2 D1849A PCR 产物 | 第31页 |
| ·HCoV-NL63 PLP1 D1225A 和 PLP2 D1849A 单克隆质粒 | 第31-32页 |
| ·单克隆质粒表达鉴定 | 第32-33页 |
| ·HCoV-NL63 PLP1 D1225A 和 PLP2 D1849A 测序结果 | 第33页 |
| ·HCoV-NL63 PLP1 及突变体对 Ub 的作用 | 第33-34页 |
| ·HCoV-NL63 PLP1 对 Ub 的 DUB 特异性检测 | 第34页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 及突变体对 Ub 的作用 | 第34-35页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 对 UbK48、UbK63 的作用 | 第35-36页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 及突变体对去 ISG15 活性研究 | 第36页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 去 ISG15 化活性的依赖性检测 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 3 实验(二)：HCoV-NL63 PLP 蛋白酶对IFN 表达的调控 | 第39-56页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·质粒和细胞 | 第39页 |
| ·设备 | 第39-40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-43页 |
| ·荧光素酶报告基因检测 | 第40-41页 |
| ·免疫共沉淀技术检测 | 第41-42页 |
| ·免疫荧光技术检测PLP2 和ERIS 共定位 | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43-53页 |
| ·HCoV-NL63 PLP1 及其突变体对 IFN-β通路的调控 | 第43-44页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 及突变体对 IFN-β通路的调控 | 第44-45页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 对 IRF-3 支路的调控 | 第45-46页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 对 NF-κB 支路的调控 | 第46-47页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 及突变体对 IFN-β总通路调控的特异性检测 | 第47-48页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 对 NF-κB 介导的 IFN 信号通路调控 | 第48-49页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 对 IRF-3 介导的 IFN 信号通路调控 | 第49-50页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 及突变体对免疫通路中关键位点的调控 | 第50-51页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 与 RIG-I 相互作用 | 第51页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 对 RIG-I 位点泛素化修饰的 DUB 活性检测 | 第51-52页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 与 ERIS 的相互作用 | 第52页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 与 ERIS 在细胞内的共定位 | 第52页 |
| ·HCoV-NL63 PLP2 对 ERIS 位点泛素化修饰的 DUB 活性检测 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| 4 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
