| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第17-23页 |
| 1.1 哺乳动物Runx家族成员及其免疫功能 | 第17-20页 |
| 1.1.1 Runx家族成员的组成及在组织发育中的作用 | 第17页 |
| 1.1.2 Runx蛋白的结构特征及CBFβ 的辅助地位 | 第17-18页 |
| 1.1.3 Runx调节免疫细胞的发育、分化和功能 | 第18-20页 |
| 1.2 哺乳动物Runx与TGF-β 调节作用的关系 | 第20-21页 |
| 1.2.1 TGF-β 在免疫反应中的调节作用 | 第20-21页 |
| 1.2.2 Runx1和Runx3介导TGF-β 的调节作用 | 第21页 |
| 1.3 硬骨鱼Runx相关转录因子的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.4 本论文的研究思路和结构组成 | 第22-23页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第23-29页 |
| 2.1 实验动物 | 第23页 |
| 2.2 细胞培养 | 第23页 |
| 2.2.1 草鱼外周血白细胞的分离培养 | 第23页 |
| 2.2.2 细胞株的培养 | 第23页 |
| 2.3 体外细菌感染实验 | 第23-24页 |
| 2.3.1 嗜水气单胞杆菌的培养 | 第23-24页 |
| 2.3.2 草鱼活体感染实验 | 第24页 |
| 2.4 基因克隆 | 第24-25页 |
| 2.4.1 组织与细胞中RNA的提取 | 第24页 |
| 2.4.2 cDNA模板的制备 | 第24页 |
| 2.4.3 cDNA片段的扩增 | 第24-25页 |
| 2.4.4 cDNA末端快速扩增 | 第25页 |
| 2.4.5 CDS全长的验证 | 第25页 |
| 2.5 基因mRNA表达水平的检测 | 第25-26页 |
| 2.6 蛋白表达载体的构建 | 第26页 |
| 2.7 细胞的瞬时转染 | 第26-27页 |
| 2.8 转录因子的亚细胞定位 | 第27页 |
| 2.9 蛋白表达水平的检测 | 第27-28页 |
| 2.9.1 细胞总蛋白的提取 | 第27页 |
| 2.9.2 免疫印迹 | 第27-28页 |
| 2.10 多克隆抗体的制备与特异性验证 | 第28页 |
| 2.11 生物信息学分析 | 第28页 |
| 2.12 数据统计与分析 | 第28-29页 |
| 第三章 草鱼Runx1和Runx3的分离鉴定和诱导表达分析 | 第29-44页 |
| 3.1 概述 | 第29-30页 |
| 3.2 材料与方法 | 第30-32页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第30页 |
| 3.2.2 草鱼Runx1和Runx3的分离鉴定 | 第30-31页 |
| 3.2.3 草鱼Runx1和Runx3的组织分布 | 第31页 |
| 3.2.4 草鱼Runx1和Runx3在体外免疫刺激条件下的诱导表达 | 第31页 |
| 3.2.5 草鱼Runx1和Runx3在体内感染条件下的诱导表达 | 第31-32页 |
| 3.2.6 生物信息学分析 | 第32页 |
| 3.2.7 数据统计与分析 | 第32页 |
| 3.3 结果 | 第32-41页 |
| 3.3.1 草鱼Runx1剪接体和Runx3的cDNA及氨基酸序列的分析 | 第32-38页 |
| 3.3.2 草鱼Runx1剪接体和Runx3的组织分布特征 | 第38-39页 |
| 3.3.3 LPS、PHA和poly I:C对草鱼外周血中Runx1剪接体和Runx3表达的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.4 嗜水气单胞杆菌感染对草鱼免疫组织中Runx1剪接体和Runx3表达的影响 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-43页 |
| 3.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 草鱼Runx辅助因子CBFβ 的分离鉴定和表达特征 | 第44-55页 |
| 4.1 概述 | 第44-45页 |
| 4.2 材料与方法 | 第45-46页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第45页 |
| 4.2.2 草鱼CBFβ 的分离鉴定 | 第45页 |
| 4.2.3 草鱼CBFβ 的 3D结构建模 | 第45页 |
| 4.2.4 草鱼CBFβ 的组织分布 | 第45页 |
| 4.2.5 草鱼CBFβ-pEGFP-N1表达质粒的构建 | 第45-46页 |
| 4.2.6 草鱼CBFβ 的亚细胞定位 | 第46页 |
| 4.2.7 草鱼CBFβ 在体外免疫刺激条件下的表达 | 第46页 |
| 4.2.8 草鱼CBFβ 的体内诱导表达 | 第46页 |
| 4.2.9 生物信息学分析 | 第46页 |
| 4.2.10 数据统计与分析 | 第46页 |
| 4.3 结果 | 第46-53页 |
| 4.3.1 草鱼CBFβ 的cDNA及氨基酸序列分析 | 第46-49页 |
| 4.3.2 草鱼CBFβ 的 3D结构预测 | 第49页 |
| 4.3.3 草鱼CBFβ 的组织分布特征 | 第49-50页 |
| 4.3.4 草鱼CBFβ 的表达质粒主要定位于细胞核 | 第50页 |
| 4.3.5 LPS、PHA、poly I:C对草鱼外周血中CBFβ 表达的影响 | 第50-51页 |
| 4.3.6 嗜水气单胞杆菌感染对草鱼免疫组织CBFβ 表达的影响 | 第51-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-54页 |
| 4.5 本章小结 | 第54-55页 |
| 第五章 草鱼Runx1和Runx3的功能鉴定 | 第55-68页 |
| 5.1 概述 | 第55-56页 |
| 5.2 材料与方法 | 第56-59页 |
| 5.2.1 实验动物 | 第56页 |
| 5.2.2 草鱼外周血白细胞的分离 | 第56页 |
| 5.2.3 CIK细胞株的培养 | 第56页 |
| 5.2.4 带GFP标签的Runx1和Runx3表达质粒的构建 | 第56-57页 |
| 5.2.5 草鱼Runx1五种剪接体和Runx3的亚细胞定位 | 第57页 |
| 5.2.6 草鱼IL-4 的分离鉴定 | 第57页 |
| 5.2.7 阻断Runx1信号对细胞因子和转录因子表达的影响 | 第57-58页 |
| 5.2.8 Runx3过表达对转录因子表达的影响 | 第58页 |
| 5.2.9 Runx1、Runx3与CBFβ 的相互作用研究 | 第58-59页 |
| 5.2.10 数据统计与分析 | 第59页 |
| 5.3 结果 | 第59-66页 |
| 5.3.1 Runx1各剪接体及Runx3的表达质粒主要定位于细胞核 | 第59-60页 |
| 5.3.2 阻断Runx1信号抑制了IFN-?、IL-4、IL-17A/F1和IL-17A/F2的诱导表达 | 第60-64页 |
| 5.3.2.1 草鱼IL-4 的分离克隆 | 第60-61页 |
| 5.3.2.2 阻断Runx1信号对IFN-?、IL-4、IL-17A/F1、IL-17A/F2和Foxp3的影响 | 第61-64页 |
| 5.3.3 Runx3过表达对T-bet、GATA3和Foxp3表达的影响 | 第64-65页 |
| 5.3.4 Runx1、Runx3与CBFβ 的相互调节作用 | 第65-66页 |
| 5.4 讨论 | 第66-67页 |
| 5.5 本章小结 | 第67-68页 |
| 第六章 草鱼TGF-β 免疫调节作用中Runx1和Runx3的表达和功能研究 | 第68-83页 |
| 6.1 概述 | 第68-69页 |
| 6.2 材料与方法 | 第69-72页 |
| 6.2.1 实验动物 | 第69页 |
| 6.2.2 草鱼外周血白细胞的分离 | 第69页 |
| 6.2.3 HEK-293和CIK细胞株的培养 | 第69页 |
| 6.2.4 Runx3-pcDNA3.1 和Runx3 DN-EGFP表达质粒的构建及验证 | 第69-70页 |
| 6.2.5 Runx3多克隆抗体的验证 | 第70页 |
| 6.2.6 草鱼nIL-1F的分子鉴定 | 第70-71页 |
| 6.2.7 草鱼TGF-β1 对Runx1、Runx3、CBFβ 及nIL-1F基因mRNA表达水平的影响 | 第71页 |
| 6.2.8 草鱼TGF-β1 对Runx3蛋白质表达水平的影响 | 第71页 |
| 6.2.9 阻断Runx1信号对c-Myc和nIL-1F的影响 | 第71-72页 |
| 6.2.10 Runx3过表达及显性失活对c-Myc和nIL-1F的影响 | 第72页 |
| 6.2.11 数据统计与分析 | 第72页 |
| 6.3 结果 | 第72-81页 |
| 6.3.1 草鱼TGF-β1 调节Runx1和CBFβ 的表达 | 第72-73页 |
| 6.3.2 草鱼TGF-β1 显著上调Runx3的mRNA及蛋白质表达水平 | 第73-75页 |
| 6.3.2.1 Runx3多克隆抗体的特异性验证 | 第73-74页 |
| 6.3.2.2 草鱼TGF-β1 显著上调Runx3的mRNA及蛋白质表达水平 | 第74-75页 |
| 6.3.3 Runx1和Runx3在草鱼TGF-β1 调节转录因子c-Myc表达中的作用 | 第75-77页 |
| 6.3.3.1 草鱼TGF-β1 抑制外周血白细胞c-Myc的基因表达 | 第75页 |
| 6.3.3.2 Runx1在草鱼TGF-β1 调节c-Myc表达中的作用 | 第75-76页 |
| 6.3.3.3 Runx3过表达及显性失活对c-Myc表达的影响 | 第76-77页 |
| 6.3.4 Runx1和Runx3在草鱼TGF-β1 调节炎症相关新分子nIL-1F表达中的作用 | 第77-81页 |
| 6.3.4.1 草鱼nIL-1F的分离克隆 | 第77-79页 |
| 6.3.4.2 草鱼TGF-β1 抑制外周血白细胞nIL-1F的表达 | 第79-80页 |
| 6.3.4.3 Runx1在草鱼TGF-β1 调节nIL-1F表达中的作用 | 第80-81页 |
| 6.3.4.4 Runx3对草鱼TGF-β1 调节nIL-1F表达的影响 | 第81页 |
| 6.4 讨论 | 第81-82页 |
| 6.5 本章小结 | 第82-83页 |
| 第七章 结论与展望 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-98页 |
| 附录 | 第98-102页 |
| 攻读博士学位期间取得的成果 | 第102-103页 |
