| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 前言 | 第15-42页 |
| 1.1 口蹄疫病毒简介 | 第15-17页 |
| 1.1.1 口蹄疫的发现和疫情控制 | 第15-16页 |
| 1.1.2 口蹄疫病毒 | 第16-17页 |
| 1.1.3 口蹄疫病毒的进化 | 第17页 |
| 1.2 口蹄疫病毒持续感染细胞的研究进展 | 第17-22页 |
| 1.2.1 病毒持续感染细胞的建立 | 第17-19页 |
| 1.2.2 病毒持续感染细胞形成的机制 | 第19-20页 |
| 1.2.3 病毒在持续感染中的进化 | 第20页 |
| 1.2.4 宿主细胞在病毒持续感染中的进化 | 第20-21页 |
| 1.2.5 病毒和宿主细胞在持感中的共进化 | 第21页 |
| 1.2.6 口蹄疫病毒持感细胞的应用研究 | 第21-22页 |
| 1.3 EBP基因的相关研究 | 第22-25页 |
| 1.3.1 EBP基因的简介及其编码蛋白所行使的功能 | 第22-24页 |
| 1.3.2 人类EBP基因突变导致的疾病 | 第24-25页 |
| 1.3.3 EBP基因与病毒感染的相关性 | 第25页 |
| 1.4 单细胞研究技术的建立及其发展 | 第25-40页 |
| 1.4.1 单细胞研究的历史 | 第25-28页 |
| 1.4.2 单细胞转录谱分析方面的发展 | 第28-36页 |
| 1.4.2.1 单细胞转录谱分析技术 | 第28-30页 |
| 1.4.2.2 单细胞转录谱的获得 | 第30-33页 |
| 1.4.2.3 单细胞转录谱分析的应用 | 第33-34页 |
| 1.4.2.4 单细胞转录谱分析的局限性 | 第34-35页 |
| 1.4.2.5 单细胞转录谱分析的前景 | 第35-36页 |
| 1.4.3 单细胞PCR技术的应用 | 第36-40页 |
| 1.4.3.1 植入前诊断、母体血液胚胎细胞诊断以及胚胎发育方面的应用 | 第36-37页 |
| 1.4.3.2 神经元细胞内基因表达谱分析 | 第37-39页 |
| 1.4.3.3 免疫分化及免疫应答 | 第39页 |
| 1.4.3.4 单细胞PCR技术在病毒学研究中的应用 | 第39-40页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第40-42页 |
| 第二章 EBP基因的克隆、鉴定和荧光定量PCR技术的建立 | 第42-64页 |
| 2.1 引言 | 第42页 |
| 2.2 材料和方法 | 第42-55页 |
| 2.2.1 材料 | 第42-44页 |
| 2.2.2 方法 | 第44-55页 |
| 2.2.2.1 细胞培养、冻存及复苏 | 第44-45页 |
| 2.2.2.2 群体细胞的急性感染 | 第45页 |
| 2.2.2.3 RNA的提取 | 第45页 |
| 2.2.2.4 EBP基因的克隆 | 第45-52页 |
| 2.2.2.5 EBP基因在BHK-21细胞中的表达 | 第52-53页 |
| 2.2.2.6 EBP基因定量PCR技术的建立 | 第53-55页 |
| 2.3 结果与分析 | 第55-62页 |
| 2.3.1 病毒持续感染和急性感染群体细胞中EBP基因表达量的变化 | 第55-56页 |
| 2.3.2 EBP基因的克隆与重组质粒的构建 | 第56-59页 |
| 2.3.3 EBP重组质粒在BHK-21细胞中的表达 | 第59页 |
| 2.3.4 EBP基因荧光定量PCR检测技术的建立 | 第59-62页 |
| 2.3.4.1 荧光染料法 | 第59-60页 |
| 2.3.4.2 探针法 | 第60-62页 |
| 2.4 讨论 | 第62-64页 |
| 第三章 从单细胞水平探讨口蹄疫病毒持续感染发生、发展机制 | 第64-84页 |
| 3.1 引言 | 第64页 |
| 3.2 材料和方法 | 第64-70页 |
| 3.2.1 材料 | 第64-65页 |
| 3.2.2 方法 | 第65-70页 |
| 3.2.2.1 TCID_(50)实验 | 第65-66页 |
| 3.2.2.2 单细胞的挑取和裂解 | 第66-67页 |
| 3.2.2.3 单细胞技术运用于群体细胞的挑取和裂解 | 第67页 |
| 3.2.2.4 群体细胞的相对荧光定量RT-PCR检测 | 第67-68页 |
| 3.2.2.5 单细胞实时荧光定量RT-PCR | 第68-70页 |
| 3.3 结果与分析 | 第70-81页 |
| 3.3.1 探针法单细胞荧光定量PCR技术的验证与应用 | 第70-72页 |
| 3.3.2 持感细胞释放病毒的感染性实验 | 第72-73页 |
| 3.3.3 持感细胞胞内病毒载量的检测 | 第73-74页 |
| 3.3.4 不同代次持感细胞的形态学特征 | 第74-75页 |
| 3.3.5 不同代次持感细胞中EBP基因和病毒3D基因的表达变化 | 第75-77页 |
| 3.3.6 传代持感单细胞中EBP基因和口蹄疫病毒3D基因的表达分析 | 第77-79页 |
| 3.3.7 各代次持感单细胞EBP基因与3D基因的关系分析 | 第79-81页 |
| 3.4 讨论 | 第81-84页 |
| 第四章 单细胞技术探讨口蹄疫病毒急性感染的调节机制 | 第84-103页 |
| 4.1 引言 | 第84页 |
| 4.2 材料和方法 | 第84-89页 |
| 4.2.1 材料 | 第84-85页 |
| 4.2.2 方法 | 第85-89页 |
| 4.2.2.1 质粒pEGFP-EBP转染BHK-21细胞实验 | 第85页 |
| 4.2.2.2 过表达EBP基因的BHK-21重组细胞构建 | 第85-88页 |
| 4.2.2.3 病毒最适感染滴度实验 | 第88页 |
| 4.2.2.4 单细胞的挑取和裂解 | 第88-89页 |
| 4.2.2.5 单细胞实时荧光定量PCR | 第89页 |
| 4.3 结果与分析 | 第89-101页 |
| 4.3.1 病毒最适感染滴度的优化 | 第89-92页 |
| 4.3.2 急性感染单细胞EBP基因和3D基因的正态分布图 | 第92-93页 |
| 4.3.3 急性感染情况下单细胞EBP基因和3D基因的关系 | 第93-95页 |
| 4.3.4 在BHK-21细胞中瞬时过表达EBP基因对口蹄疫病毒复制的影响 | 第95-97页 |
| 4.3.5 EBP基因过表达细胞株的建立 | 第97-99页 |
| 4.3.6 过表达EBP基因对口蹄疫病毒复制的影响 | 第99-101页 |
| 4.3.6.1 过表达细胞系中EBP基因过表达的定量检测 | 第99页 |
| 4.3.6.2 EBP基因的过表达对口蹄疫病毒复制效率的影响 | 第99-101页 |
| 4.4 讨论 | 第101-103页 |
| 研究总结 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-119页 |
| 在读期间发表和待发表的论文 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120页 |
