| 本研究创新点 | 第5-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 研究背景 | 第14-52页 |
| 1.Ras蛋白简介 | 第14-18页 |
| 1.1 Ras蛋白的发现 | 第14页 |
| 1.2 Ras蛋白的结构 | 第14-15页 |
| 1.3 Ras蛋白的活性调节 | 第15-16页 |
| 1.4 Ras蛋白的定位 | 第16页 |
| 1.5 Ras蛋白的功能 | 第16-18页 |
| 2.二型性转换 | 第18-50页 |
| 2.1 酿酒酵母的二型性转换 | 第18-27页 |
| 2.2 白色念珠菌的二型性转换 | 第27-35页 |
| 2.3 解脂耶氏酵母的二型性转换 | 第35-50页 |
| 3.本课题研究的目的、内容和意义 | 第50-52页 |
| 3.1 研究目的 | 第51页 |
| 3.2 研究内容 | 第51页 |
| 3.3 研究意义 | 第51-52页 |
| 第二章 Ras蛋白在解脂耶氏酵母菌丝形成过程中的功能鉴定 | 第52-85页 |
| 1.实验材料 | 第52-57页 |
| 1.1 本部分实验所用到的菌株和质粒 | 第52-54页 |
| 1.2 药品与试剂 | 第54页 |
| 1.3 培养基和溶液的制备 | 第54-57页 |
| 2.实验方法 | 第57-65页 |
| 2.1 解脂耶氏酵母的基因敲除 | 第57-60页 |
| 2.2 解脂耶氏酵母的快速转化 | 第60页 |
| 2.3 解脂耶氏酵母的细胞培养及细胞形态的观察 | 第60-61页 |
| 2.4 解脂耶氏酵母的侵入性生长 | 第61页 |
| 2.5 解脂耶氏酵母基因的过量表达 | 第61-62页 |
| 2.6 细胞粗提物中半乳糖苷酶活性的测定 | 第62-63页 |
| 2.7 基因的定点突变 | 第63-65页 |
| 2.8 基因缺失突变体的回补 | 第65页 |
| 3.实验结果 | 第65-82页 |
| 3.1 Y1Ras的鉴定与结构分析 | 第65-67页 |
| 3.2 Y1RAS基因的敲除 | 第67-70页 |
| 3.3 Y1rasΔ突变体的表型鉴定 | 第70-74页 |
| 3.4 Y1RAS的多重缺失突变体的表型鉴定 | 第74-76页 |
| 3.5 Y1RAS的过量表达对菌丝形成的影响 | 第76-77页 |
| 3.6 Y1RAS2的激活型突变体对菌丝形成的影响 | 第77-78页 |
| 3.7 Y1RAS在菌丝形成过程中的转录水平的变化 | 第78-79页 |
| 3.8 Y1Ras2 C端突变体的定位及功能鉴定 | 第79-82页 |
| 4.讨论 | 第82-84页 |
| 4.1 解脂耶氏酵母中存在一个K-Ras4B类似的Ras蛋白 | 第82页 |
| 4.2 Y1Ras2激活型突变体未能强烈促进菌丝形成的可能原因 | 第82-83页 |
| 4.3 Y1Ras2 C端突变体具有部分促进菌丝形成的功能 | 第83页 |
| 4.4 Y1Ras2调控菌丝形成的信号途径 | 第83-84页 |
| 5.小结 | 第84-85页 |
| 第三章 MAPK和cAMP-PKA信号途径在Y1Ras2调控菌丝形成过程中的作用 | 第85-101页 |
| 1.实验材料 | 第86-87页 |
| 1.1 实验所用的菌株及质粒 | 第86-87页 |
| 1.2 药品与试剂 | 第87页 |
| 1.3 培养基和溶液的制备 | 第87页 |
| 2.实验方法 | 第87-89页 |
| 2.1 Y1STE20、Y1STE11及Y1KSS1的敲除 | 第87-88页 |
| 2.2 基因的过量表达 | 第88-89页 |
| 2.3 基因缺失突变体的回补 | 第89页 |
| 3.实验结果 | 第89-99页 |
| 3.1 Y1Ste20、Y1Ste11和Y1Kss1的鉴定 | 第89-92页 |
| 3.2 Y1STE20、Y1STE11和Y1KSS1的敲除 | 第92-93页 |
| 3.3 Y1ste20△、Y1ste11△和Y1kss1△突变体的表型鉴定 | 第93-96页 |
| 3.4 Y1STE20、Y1STE11和Y1KSS1的过量表达 | 第96-97页 |
| 3.5 Y1Ste20、Y1Ste11和Y1Kss1之间的上下游关系研究 | 第97-98页 |
| 3.6 MAPK和cAMP-PKA信号途径在Y1Ras2调控菌丝形成过程中的作用 | 第98-99页 |
| 4.讨论 | 第99-100页 |
| 4.1 解脂耶氏酵母菌丝形成的调控途径 | 第99页 |
| 4.2 Y1Ras2调控菌丝形成存在新的信号传递途径 | 第99-100页 |
| 5.小结 | 第100-101页 |
| 第四章 Y1Ras2调控菌丝形成的其它途径 | 第101-116页 |
| 1.实验材料 | 第102-103页 |
| 1.1 实验所用的菌株及质粒 | 第102页 |
| 1.2 药品与试剂 | 第102页 |
| 1.3 培养基和溶液的制备 | 第102-103页 |
| 2.实验方法 | 第103-108页 |
| 2.1 插入元件的构建 | 第103-104页 |
| 2.2 筛选过量表达回复子的步骤 | 第104页 |
| 2.3 酵母基因组DNA的提取方法 | 第104-105页 |
| 2.4 TAIL-PCR鉴定回复子中发生过量表达的基因 | 第105-107页 |
| 2.5 HOY1基因的敲除 | 第107-108页 |
| 2.6 基因的过量表达 | 第108页 |
| 3.实验结果 | 第108-113页 |
| 3.1 过量表达回复子的筛选 | 第108-110页 |
| 3.2 mut5中发生过量表达的基因为HOY1 | 第110-111页 |
| 3.3 Hoy1的功能鉴定 | 第111-112页 |
| 3.4 Hoy1与Mhy1的关系推测 | 第112页 |
| 3.5 Y1Ras2调控菌丝形成的功能可能与Hoy1和Mhy1有关 | 第112-113页 |
| 4.讨论 | 第113-115页 |
| 4.1 Y1Ras2与Hoy1的关系 | 第113-114页 |
| 4.2 Hoy1与Mhy1的关系 | 第114页 |
| 4.3 Y1Ras2与Mhy1的关系 | 第114页 |
| 4.4 y1ras2调控菌丝形成的新途径 | 第114-115页 |
| 5.小结 | 第115-116页 |
| 研究总结及展望 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-129页 |
| 在读期间已发表论文 | 第129-130页 |
| 致谢 | 第130页 |
