| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第10-24页 |
| 1.1 药用植物和药用真菌萜类天然产物研究进展 | 第10-14页 |
| 1.1.1 药用植物单萜类化合物 | 第10-11页 |
| 1.1.2 药用植物和药用真菌倍半萜类化合物 | 第11-12页 |
| 1.1.3 药用植物和药用真菌二萜类化合物 | 第12-13页 |
| 1.1.4 药用植物和药用真菌三萜类化合物 | 第13-14页 |
| 1.2 萜类生物合成途径及倍半萜合酶研究 | 第14-18页 |
| 1.2.1 萜类生物合成途径分析 | 第14-15页 |
| 1.2.2 倍半萜合酶研究概述 | 第15-18页 |
| 1.3 灵芝属基因组研究概述 | 第18-23页 |
| 1.3.1 赤芝基因组研究概述 | 第19-21页 |
| 1.3.2 紫芝(Ganoderma sinense)基因组研究概述 | 第21-22页 |
| 1.3.3 Ganoderma sp.基因组研究概述及比较 | 第22-23页 |
| 1.4 灵芝萜类合酶研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 研究材料与方法 | 第24-40页 |
| 2.1 材料、试剂与设备 | 第24-26页 |
| 2.1.1 灵芝材料及数据来源 | 第24页 |
| 2.1.2 试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要设备 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-40页 |
| 2.2.1 赤芝萜类合酶基因家族的预测 | 第26页 |
| 2.2.2 赤芝总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.3 萜类合酶基因的克隆 | 第27-30页 |
| 2.2.3.1 引物设计 | 第27-29页 |
| 2.2.3.2 cDNA第一链的合成 | 第29-30页 |
| 2.2.3.3 萜类合酶基因全长CDS的克隆 | 第30页 |
| 2.2.4 PCR产物琼脂糖电泳回收 | 第30-31页 |
| 2.2.5 PCR产物末端加A | 第31页 |
| 2.2.6 目的片段与载体连接 | 第31-32页 |
| 2.2.7 大肠杆菌转化 | 第32页 |
| 2.2.8 PCR鉴定阳性克隆及测序 | 第32-33页 |
| 2.2.9 阳性克隆的质粒提取 | 第33页 |
| 2.2.10 片段与表达载体的双酶切 | 第33-34页 |
| 2.2.11 萜类合酶的诱导表达 | 第34页 |
| 2.2.12 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的表达 | 第34-36页 |
| 2.2.13 气质联用技术检测催化产物 | 第36页 |
| 2.2.14 实时荧光定量PCR | 第36-38页 |
| 2.2.15 液体培养灵芝菌丝产物分析 | 第38页 |
| 2.2.16 灵芝萜类合酶生物信息学分析 | 第38-40页 |
| 第三章 结果 | 第40-61页 |
| 3.1 灵芝萜类合酶基因家族的生物信息学分析 | 第40-44页 |
| 3.1.1 灵芝属萜类合酶遗传进化及内含子相位分析 | 第40-41页 |
| 3.1.2 赤芝萜类合酶多重序列比对分析 | 第41-43页 |
| 3.1.3 赤芝萜类合酶蛋白序列特征分析 | 第43-44页 |
| 3.2 萜类合酶基因家族在赤芝不同发育时期的表达分析 | 第44-46页 |
| 3.3 赤芝液体培养菌丝中倍半萜类产物分析 | 第46-50页 |
| 3.4 赤芝萜类合酶基因家族的克隆及表达载体的构建 | 第50-53页 |
| 3.5 赤芝萜类合酶的诱导表达及产物分析 | 第53-61页 |
| 3.5.1 赤芝萜类合酶的SDS-PAGE分析 | 第53-55页 |
| 3.5.2 赤芝萜类合酶催化产物的鉴定和分析 | 第55-61页 |
| 第四章 讨论 | 第61-65页 |
| 4.1 液体培养赤芝菌丝体合成的倍半萜与异源表达赤芝萜类合酶合成的倍半萜的比较分析 | 第61页 |
| 4.2 赤芝萜类合酶可能的环化机制分析 | 第61-62页 |
| 4.3 萜类合酶系统进化与功能多样性的关系初探 | 第62-65页 |
| 第五章 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 缩略词 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 作者简历 | 第116-117页 |
