| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| 1.1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1.1 PMI蛋白的性质 | 第11-12页 |
| 1.1.2 PMI的分布及分类 | 第12-13页 |
| 1.1.3 PMI蛋白的催化机理 | 第13-14页 |
| 1.1.4 PMI蛋白的结构特点 | 第14-15页 |
| 1.1.5 PMI蛋白的应用 | 第15-17页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.1 生物转化法得到L-核糖 | 第17-18页 |
| 1.2.2 作为转基因植物的筛选标记 | 第18-19页 |
| 1.3 本课题研究目的、内容和意义 | 第19-22页 |
| 1.3.1 本课题的研究目的 | 第19页 |
| 1.3.2 本课题的研究内容 | 第19-20页 |
| 1.3.3 本课题的研究意义 | 第20-22页 |
| 第二章 磷酸甘露糖异构酶基因的克隆和异源表达 | 第22-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22-24页 |
| 2.1.3 培养基及缓冲液的配制 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-37页 |
| 2.2.1 菌株活化及基因组的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2 目的基因的扩增 | 第27-29页 |
| 2.2.3 克隆载体pMD18-T-pmi的构建 | 第29-32页 |
| 2.2.4 表达载体pET22b-PMI的构建 | 第32-37页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第37-43页 |
| 2.3.1 蜡状芽孢杆菌CZ全基因组的提取 | 第37-38页 |
| 2.3.2 目的基因pmi片段的扩增 | 第38页 |
| 2.3.3 克隆载体pMD18-T-pmi的构建及鉴定 | 第38-41页 |
| 2.3.4 表达载体pET22b-PMI的构建结果及鉴定 | 第41-43页 |
| 2.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 重组酶异源表达条件优化及其分离纯化 | 第44-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 3.1.1 菌种 | 第44页 |
| 3.1.2 材料和试剂 | 第44-45页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-50页 |
| 3.2.1 不同温度和培养时间对重组酶表达量的影响 | 第45-46页 |
| 3.2.2 不同IPTG诱导浓度对重组酶表达量的影响 | 第46页 |
| 3.2.3 菌体OD对重组酶表达量的影响 | 第46页 |
| 3.2.4 重组酶的分离纯化 | 第46-50页 |
| 3.2.5 生物信息学分析 | 第50页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第50-57页 |
| 3.3.1 不同温度和培养时间对重组酶表达量的影响 | 第50-52页 |
| 3.3.2 不同IPTG诱导浓度对重组酶表达量的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.3 菌体OD对重组酶表达量的影响 | 第53页 |
| 3.3.4 分离纯化结果 | 第53-55页 |
| 3.3.5 生物信息分析结果 | 第55-57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57-59页 |
| 第四章 重组酶的酶学性质研究 | 第59-73页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-62页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第59-60页 |
| 4.1.2 缓冲液的配制 | 第60-61页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第61-62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-65页 |
| 4.2.1 蛋白质浓度测定 | 第62-63页 |
| 4.2.2 酶活力测定方法 | 第63-64页 |
| 4.2.3 最适反应温度和温度稳定性 | 第64-65页 |
| 4.2.4 最适反应pH及pH的稳定性 | 第65页 |
| 4.2.5 不同金属离子及金属离子的不同浓度对酶活力的影响 | 第65页 |
| 4.2.6 底物特异性研究 | 第65页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第65-71页 |
| 4.3.1 标准曲线 | 第65-67页 |
| 4.3.2 温度对重组磷酸甘露糖异构酶的影响及重组酶的热稳定性 | 第67-68页 |
| 4.3.3 pH对重组磷酸甘露糖异构酶的影响及重组酶的pH稳定性 | 第68-69页 |
| 4.3.4 金属对重组磷酸甘露糖异构酶的影响 | 第69-70页 |
| 4.3.5 底物特异性研究 | 第70-71页 |
| 4.4 本章小结 | 第71-73页 |
| 结论与展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 附录 | 第82-84页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 答辩委员会对论文的评定意见 | 第86页 |
