| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略语表 | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1.1 胃癌现状 | 第13-16页 |
| 1.1.1 胃癌流行病学 | 第13-14页 |
| 1.1.2 胃癌发生风险因素 | 第14-15页 |
| 1.1.3 胃癌的防治策略 | 第15-16页 |
| 1.2 Wnt信号通路简介 | 第16-22页 |
| 1.2.1 经典Wnt信号通路也称为Wnt/β-catenin/LEF/TCF途径 | 第17-18页 |
| 1.2.2 非经典Wnt信号通路 | 第18-19页 |
| 1.2.3 Wnts配体 | 第19-20页 |
| 1.2.4 Wnt受体 | 第20-21页 |
| 1.2.5 Wnt抑制基因 | 第21-22页 |
| 1.3 Wnt信号通路与胃癌 | 第22-23页 |
| 1.4 DNA甲基化研究概述 | 第23-28页 |
| 1.4.1 DNA甲基化简介 | 第23-24页 |
| 1.4.2 DNA甲基化检测方法综述 | 第24-28页 |
| 第二章 Wnt抑制基因甲基化在胃癌中的研究 | 第28-48页 |
| 2.1 引言 | 第28-29页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.1 样本收集 | 第29页 |
| 2.2.2 主要试剂: | 第29页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-36页 |
| 2.3.1 DNA提取 | 第30页 |
| 2.3.2 新鲜组织样本总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.3.3 亚硫酸氢盐对DNA样本进行预处理 | 第31-32页 |
| 2.3.4 目标基因启动子区的扩增 | 第32-34页 |
| 2.3.5 RNA表达检测 | 第34-36页 |
| 2.4 统计分析 | 第36页 |
| 2.5 实验结果 | 第36-45页 |
| 2.5.1 Wnt抑制基因启动子区甲基化检测方法的建立 | 第36-37页 |
| 2.5.2 Wnt抑制基因甲基化在胃癌与癌旁组织的比较 | 第37-39页 |
| 2.5.3 Wnt抑制基因SRP2和DKK2在胃癌中共发存在 | 第39-41页 |
| 2.5.4 Wnt抑制基因甲基化与mRNA表达 | 第41-42页 |
| 2.5.5 SFRP2与DKK2共发高甲基化与β-catenin表达相关 | 第42-43页 |
| 2.5.6 Wnt抑制基因甲基化与临床病理的关系 | 第43页 |
| 2.5.7 总生存期分析 | 第43-44页 |
| 2.5.8 DAC药物处理后Wnt抑制基因表达的恢复 | 第44-45页 |
| 2.6 讨论 | 第45-48页 |
| 第三章 DKK2基因在胃癌细胞中功能的研究 | 第48-67页 |
| 3.1 引言 | 第48-49页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第49-50页 |
| 3.2.1 主要材料与试剂: | 第49-50页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第50页 |
| 3.3 实验方法 | 第50-59页 |
| 3.3.1 过表达慢病毒克隆的制备 | 第50-54页 |
| 3.3.2 质粒抽提 | 第54页 |
| 3.3.3 慢病毒包装与质量检测 | 第54-56页 |
| 3.3.4 细胞培养 | 第56页 |
| 3.3.5 RNA及总蛋白提取与检测 | 第56-57页 |
| 3.3.6 Western Blot检测 | 第57-58页 |
| 3.3.7 CCK8细胞增殖实验 | 第58页 |
| 3.3.8 克隆形成 | 第58页 |
| 3.3.9 细胞凋亡实验 | 第58页 |
| 3.3.10 细胞迁移 | 第58-59页 |
| 3.3.11 细胞侵袭 | 第59页 |
| 3.4 统计分析 | 第59页 |
| 3.5 实验结果 | 第59-65页 |
| 3.5.1 克隆质粒的验证 | 第59-61页 |
| 3.5.2 病毒滴度检测 | 第61页 |
| 3.5.3 细胞系筛选 | 第61-62页 |
| 3.5.4 DKK2基因过表达的验证及对β-catenin的影响 | 第62页 |
| 3.5.5 细胞增殖 | 第62-63页 |
| 3.5.6 克隆形成 | 第63页 |
| 3.5.7 细胞凋亡 | 第63-64页 |
| 3.5.8 迁移实验 | 第64-65页 |
| 3.5.9 侵袭实验 | 第65页 |
| 3.6 讨论 | 第65-67页 |
| 第四章 Wnt信号通路在胃癌的整合分析 | 第67-84页 |
| 4.1 引言 | 第67-68页 |
| 4.2 实验方法 | 第68页 |
| 4.2.1 获取Wnt信号通路基因 | 第68页 |
| 4.2.2 TCGA数据的处理 | 第68页 |
| 4.2.3 甲基化数据的获取 | 第68页 |
| 4.3 统计分析 | 第68页 |
| 4.4 实验结果 | 第68-82页 |
| 4.4.1 Wnt信号通路基因突变 | 第69-73页 |
| 4.4.2 Wnt信号通路mRNA表达异常 | 第73-75页 |
| 4.4.3 Wnt信号通路甲基化分析 | 第75-80页 |
| 4.4.4 Wnt信号通路甲基化异常基因筛选 | 第80-82页 |
| 4.5 讨论 | 第82-84页 |
| 全文总结 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-101页 |
| 附录 | 第101-118页 |
| 攻读博士学位期间取得的科研成果 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 作者简介 | 第120页 |
