| 致谢 | 第4-5页 |
| 缩略词表 | 第5-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 植物体细胞胚发生概述 | 第12-13页 |
| 1.2 牡丹体细胞胚诱导研究现状 | 第13-14页 |
| 1.2.1 牡丹组织培养研究概述 | 第13页 |
| 1.2.2 牡丹愈伤组织诱导研究进展 | 第13页 |
| 1.2.3 牡丹体胚发生研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 植物遗传转化技术的应用 | 第14-15页 |
| 1.3.1 植物遗传转化概述 | 第14页 |
| 1.3.2 植物遗传转化途径与方法 | 第14-15页 |
| 1.4 农杆菌介导的植物遗传转化 | 第15-18页 |
| 1.4.1 农杆菌介导植物遗传转化的应用 | 第15页 |
| 1.4.2 农杆菌转化植物细胞的机理 | 第15-16页 |
| 1.4.3 农杆菌转化系统的发展 | 第16-17页 |
| 1.4.3.1 菌株的发展 | 第16页 |
| 1.4.3.2 载体系统的发展 | 第16-17页 |
| 1.4.4 影响农杆菌介导植物遗传转化的因素 | 第17-18页 |
| 1.4.4.1 农杆菌菌株类型对转化的影响 | 第17页 |
| 1.4.4.2 外植体类型对转化的影响 | 第17-18页 |
| 1.4.4.3 转化条件对转化的影响 | 第18页 |
| 1.4.4.4 选择性抗生素对转化的影响 | 第18页 |
| 1.5 问题与展望 | 第18-20页 |
| 2 引言 | 第20-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-34页 |
| 3.1 试验材料 | 第22-24页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第22-23页 |
| 3.1.2 植物材料 | 第23页 |
| 3.1.3 试验试剂 | 第23页 |
| 3.1.4 药品的配制 | 第23-24页 |
| 3.1.5 细菌培养基的配制 | 第24页 |
| 3.1.6 主要仪器 | 第24页 |
| 3.2 试验方法 | 第24-34页 |
| 3.2.1 试验材料的前期处理 | 第24-25页 |
| 3.2.1.1 愈伤组织的诱导培养 | 第24-25页 |
| 3.2.1.2 愈伤组织的继代培养 | 第25页 |
| 3.2.2 表达载体的转化与检测 | 第25-28页 |
| 3.2.2.1 大肠杆菌的活化培养 | 第25页 |
| 3.2.2.2 质粒DNA的提取与检测 | 第25页 |
| 3.2.2.3 农杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 3.2.2.4 质粒DNA转化农杆菌 | 第26页 |
| 3.2.2.5 转化农杆菌的检测 | 第26-28页 |
| 3.2.3 牡丹愈伤组织遗传转化体系的初步构建 | 第28-34页 |
| 3.2.3.1 筛选剂(Kan、Hyg)的选择及敏感性试验 | 第28-29页 |
| 3.2.3.2 抑菌剂(Cb、Cef)的选择及敏感性试验 | 第29页 |
| 3.2.3.3 农杆菌的活化培养 | 第29-30页 |
| 3.2.3.4 侵染方式的筛选 | 第30页 |
| 3.2.3.5 愈伤组织的预培养 | 第30页 |
| 3.2.3.6 农杆菌侵染愈伤组织 | 第30-31页 |
| 3.2.3.7 愈伤组织与农杆菌共培养 | 第31页 |
| 3.2.3.8 GUS基因组织化学染色 | 第31-32页 |
| 3.2.3.9 愈伤组织与农杆菌共培养后的抑菌培养 | 第32-33页 |
| 3.2.3.10 转化愈伤组织筛选培养 | 第33页 |
| 3.2.3.11 转化愈伤组织的检测 | 第33页 |
| 3.2.3.12 试验观察统计 | 第33-34页 |
| 4 试验结果与分析 | 第34-53页 |
| 4.1 质粒DNA纯度及浓度的检测 | 第34-35页 |
| 4.2 转化农杆菌的检测 | 第35-37页 |
| 4.2.1 转化农杆菌抗性筛选 | 第35页 |
| 4.2.2 GUS目的片段的PCR扩增 | 第35-36页 |
| 4.2.3 GUS目的片段的测序 | 第36-37页 |
| 4.3 牡丹愈伤组织遗传转化体系的初步构建 | 第37-53页 |
| 4.3.1 选择性抗生素(Kan、Hyg)的选择及敏感性试验 | 第37-38页 |
| 4.3.2 抑菌性抗生素(Cb、Cef)的选择及敏感性和抑菌试验 | 第38-41页 |
| 4.3.3 侵染方式的筛选 | 第41页 |
| 4.3.4 GUS基因组织化学染色方法的优化 | 第41-42页 |
| 4.3.5 预培养时间对转化的影响 | 第42-43页 |
| 4.3.6 菌种的选择 | 第43-44页 |
| 4.3.7 侵染浓度及时间的筛选 | 第44-45页 |
| 4.3.8 共培养时间及温度的筛选 | 第45-48页 |
| 4.3.9 抑菌培养方式及Cef浓度的筛选 | 第48-52页 |
| 4.3.10 转化愈伤组织的筛选培养 | 第52页 |
| 4.3.11 转化愈伤组织GUS组织化学染色检测 | 第52-53页 |
| 5 结论与讨论 | 第53-56页 |
| 5.1 菌株类型对遗传转化的影响 | 第53页 |
| 5.2 抗生素种类及浓度在遗传转化中的应用 | 第53-54页 |
| 5.2.1 选择性抗生素种类及浓度在遗传转化中的应用 | 第53-54页 |
| 5.2.2 抑菌性抗生素在遗传转化中的应用 | 第54页 |
| 5.3 遗传转化体系中相关影响因子对转化的影响 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| ABSTRACT | 第61-62页 |
| 附图 | 第63-65页 |
