| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 高等植物成花转变研究进展 | 第11页 |
| 1.2 光周期途径 | 第11-18页 |
| 1.2.1 光周期现象的生理基础 | 第11-12页 |
| 1.2.2 拟南芥光周期现象的分子生物学研究 | 第12-18页 |
| 1.2.2.1 光受体 | 第12-13页 |
| 1.2.2.2 生物钟系统 | 第13-17页 |
| 1.2.2.2.1 输入途径 | 第14-15页 |
| 1.2.2.2.2 中央振荡器 | 第15-17页 |
| 1.2.2.2.3 输出途径 | 第17页 |
| 1.2.2.3 日长的测定 | 第17-18页 |
| 1.2.2.4 开花信号的长距离传输 | 第18页 |
| 1.3 蝴蝶兰成花研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.1 蝴蝶兰生物学习性 | 第18-19页 |
| 1.3.2 蝴蝶兰成花相关基因研究进展 | 第19页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 朵丽蝶兰DhEFL4基因部分序列的获得与分析 | 第21-22页 |
| 第三章 DhEFL4基因的克隆 | 第22-38页 |
| 3.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 3.1.2 试剂 | 第22页 |
| 3.1.3 菌种和载体 | 第22页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第22-23页 |
| 3.2 试验方法 | 第23-28页 |
| 3.2.1 总RNA的提取 | 第23页 |
| 3.2.3 特异性引物设计 | 第23-24页 |
| 3.2.4 3'RACE扩增 | 第24-26页 |
| 3.2.4.1 cDNA第一链的合成 | 第24页 |
| 3.2.4.2 基因保守区序列的RT-PCR扩增 | 第24-25页 |
| 3.2.4.3 3'RACE第一轮扩增 | 第25-26页 |
| 3.2.4.4 3'RACE第二轮扩增 | 第26页 |
| 3.2.5 目的条带胶回收 | 第26-27页 |
| 3.2.6 回收产物与载体连接 | 第27页 |
| 3.2.7 大肠杆菌感受态的制备(CaCl2法) | 第27-28页 |
| 3.2.8 连接产物转化及阳性克隆筛选 | 第28页 |
| 3.2.9 菌检及测序 | 第28页 |
| 3.2.10 基因序列生物学信息学分析 | 第28页 |
| 3.2.10.1 开放阅读框查找 | 第28页 |
| 3.2.10.2 氨基酸序列分析及系统进化树构建 | 第28页 |
| 3.2.10.3 蛋白质分析预测 | 第28页 |
| 3.3 结果与分析 | 第28-37页 |
| 3.3.1 总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 3.3.2 基因保守区扩增结果 | 第29-30页 |
| 3.3.2.1 DhEFL4基因保守区扩增 | 第29-30页 |
| 3.3.3 3'RACE结果 | 第30页 |
| 3.3.3.1 DhEFL4基因扩增 | 第30页 |
| 3.3.4 cDNA序列分析 | 第30-31页 |
| 3.3.4.1 DhEFL4基因序列分析 | 第30-31页 |
| 3.3.5 蛋白质预测与分析 | 第31-33页 |
| 3.3.5.1 DhEFL4基因编码蛋白预测与分析 | 第31-33页 |
| 3.3.6 同源性分析 | 第33-35页 |
| 3.3.6.1 DhEFL4基因同源性分析 | 第33-35页 |
| 3.3.7 聚类分析 | 第35-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-38页 |
| 第四章 DhEFL4启动子的克隆与分析 | 第38-60页 |
| 4.1 材料与方法 | 第38页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第38页 |
| 4.1.2 试剂 | 第38页 |
| 4.1.3 菌种和载体 | 第38页 |
| 4.1.4 仪器设备 | 第38页 |
| 4.2 实验方法 | 第38-47页 |
| 4.2.1 DNA提取 | 第38-39页 |
| 4.2.2 基因组步移文库构建 | 第39-40页 |
| 4.2.2.1 酶切朵丽蝶兰DNA | 第39-40页 |
| 4.2.2.2 加接头 | 第40页 |
| 4.2.3 特异性引物设计 | 第40-41页 |
| 4.2.4 PCR扩增 | 第41-45页 |
| 4.2.4.1 第一次步移 | 第41-42页 |
| 4.2.4.1.1 第一次步移的第一轮PCR | 第41-42页 |
| 4.2.4.1.2 第一次步移的第二轮PCR | 第42页 |
| 4.2.4.2 第二次步移 | 第42-44页 |
| 4.2.4.2.1 第二次步移的第一轮PCR | 第43页 |
| 4.2.4.2.2 第二次步移的第二轮PCR | 第43-44页 |
| 4.2.4.3 第三次步移 | 第44-45页 |
| 4.2.4.3.1 第三次步移的第一轮PCR | 第44-45页 |
| 4.2.4.3.2 第三次步移的第二轮PCR | 第45页 |
| 4.2.5 DhEFL4启动子全长扩增 | 第45-46页 |
| 4.2.6 PCR产物回收 | 第46页 |
| 4.2.7 回收产物与载体连接 | 第46-47页 |
| 4.2.8 连接产物转化大肠杆菌及阳性克隆筛选 | 第47页 |
| 4.2.9 菌检与测序 | 第47页 |
| 4.2.10 DhEFL4启动子生物信息学分析 | 第47页 |
| 4.2.10.1 启动子在线分析工具PLACE、PlantCARE分析 | 第47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-59页 |
| 4.3.1 基因组DNA的提取 | 第47-48页 |
| 4.3.2 基因组DNA的酶切 | 第48页 |
| 4.3.3 染色体步移结果 | 第48-51页 |
| 4.3.3.1 第一次染色体步移结果 | 第48-49页 |
| 4.3.3.2 第二次染色体步移结果 | 第49-50页 |
| 4.3.3.3 第三次染色体步移结果 | 第50-51页 |
| 4.3.4 DhEFL4启动子全长扩增结果 | 第51-52页 |
| 4.3.5 DhEFL4启动子生物信息学分析 | 第52-59页 |
| 4.3.5.1 启动子在线分析工具PLACE、PlantCARE分析 | 第52-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-60页 |
| 第五章 DhELF4基因的时空表达 | 第60-69页 |
| 5.1 试验材料 | 第60页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第60页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第60页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第60页 |
| 5.2 试验方法 | 第60-64页 |
| 5.2.1 材料取样 | 第60-61页 |
| 5.2.2 提取总RNA | 第61-62页 |
| 5.2.3 引物设计 | 第62页 |
| 5.2.4 内参引物 | 第62页 |
| 5.2.5 DNA消化与cDNA的合成 | 第62-63页 |
| 5.2.6 模板与引物验证 | 第63页 |
| 5.2.7 实时定量RT-PCR | 第63-64页 |
| 5.3 结果与分析 | 第64-68页 |
| 5.3.1 模板与引物检测 | 第64-65页 |
| 5.3.2 DhEFL4基因表达分析 | 第65-68页 |
| 5.4 讨论 | 第68-69页 |
| 第六章 DhEFL4基因表达载体的构建 | 第69-79页 |
| 6.1 试验材料 | 第69页 |
| 6.1.1 菌种和载体 | 第69页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第69页 |
| 6.1.3 主要仪器设备 | 第69页 |
| 6.2 试验方法 | 第69-74页 |
| 6.2.1 提取总RNA | 第69页 |
| 6.2.2 cDNA的合成 | 第69页 |
| 6.2.3 ORF特异性引物设计 | 第69-70页 |
| 6.2.4 ORF扩增 | 第70页 |
| 6.2.5 PCR产物回收 | 第70页 |
| 6.2.6 回收产物与载体连接 | 第70-71页 |
| 6.2.7 连接产物转化大肠杆菌及阳性克隆筛选 | 第71页 |
| 6.2.8 菌检与测序 | 第71页 |
| 6.2.9 提取质粒 | 第71-72页 |
| 6.2.10 载体酶切 | 第72页 |
| 6.2.10.1 pC1301-DhEFL4载体的构建 | 第72页 |
| 6.2.11 酶切产物胶回收 | 第72页 |
| 6.2.12 酶切目的产物连接 | 第72-73页 |
| 6.2.13 连接产物转化大肠杆菌及阳性克隆筛选 | 第73页 |
| 6.2.14 表达载体第一轮酶切验证 | 第73页 |
| 6.2.14.1 pC1301-DhEFL4载体酶切验证 | 第73页 |
| 6.2.15 电击法农杆菌感受态的制备 | 第73-74页 |
| 6.2.16 载体质粒转化农杆菌及阳性克隆筛选 | 第74页 |
| 6.2.17 农杆菌菌液提取质粒 | 第74页 |
| 6.2.18 载体质粒转化大肠杆菌及阳性克隆筛选 | 第74页 |
| 6.2.19 表达载体第二轮酶切验证 | 第74页 |
| 6.3 结果与分析 | 第74-78页 |
| 6.3.1 ORF扩增 | 第74-75页 |
| 6.3.1.1 DhEFL4基因扩增结果 | 第74-75页 |
| 6.3.2 中间载体酶切结果 | 第75-76页 |
| 6.3.3 表达载体酶切验证结果 | 第76-78页 |
| 6.3.3.1 第一轮酶切验证 | 第76-77页 |
| 6.3.3.2 第二轮酶切验证 | 第77-78页 |
| 6.4 讨论 | 第78-79页 |
| 第七章 农杆菌介导法转化拟南芥 | 第79-84页 |
| 7.1 试验材料 | 第79页 |
| 7.1.1 植物材料 | 第79页 |
| 7.1.2 主要试剂 | 第79页 |
| 7.1.3 主要仪器设备 | 第79页 |
| 7.2 试验方法 | 第79-80页 |
| 7.2.1 拟南芥栽培 | 第79页 |
| 7.2.2 转化介质的配制 | 第79页 |
| 7.2.3 转化菌液的培养 | 第79-80页 |
| 7.2.4 浸花法侵染 | 第80页 |
| 7.2.5 筛选纯合子 | 第80页 |
| 7.2.6 转基因植株表型观察 | 第80页 |
| 7.2.7 拟南芥基因组DNA的提取 | 第80页 |
| 7.2.8 转基因植株PCR检测 | 第80页 |
| 7.3 结果与分析 | 第80-82页 |
| 7.3.1 转基因植株PCR检测 | 第80-81页 |
| 7.3.2 转基因植株表型分析 | 第81-82页 |
| 7.3.2.1 DhEFL4转基因分析 | 第81-82页 |
| 7.4 讨论 | 第82-84页 |
| 第八章 结论与展望 | 第84-86页 |
| 8.1 研究结论 | 第84-85页 |
| 8.2 研究展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
