| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1 启动子概述 | 第11页 |
| 2 高等植物启动子的结构及功能 | 第11-13页 |
| 2.1 核心启动子区 | 第11-12页 |
| 2.1.1 转录起始位点 | 第11-12页 |
| 2.1.2 TATA-box | 第12页 |
| 2.2 一般上游启动子元件 | 第12页 |
| 2.2.1 CAAT-box | 第12页 |
| 2.2.2 GC-box | 第12页 |
| 2.3 特有的上游启动子元件 | 第12-13页 |
| 2.3.1 G-box | 第13页 |
| 2.3.2 I-box | 第13页 |
| 3 植物启动子的类型及应用 | 第13-19页 |
| 3.1 组成型启动子 | 第14-15页 |
| 3.1.1 异源组成型启动子 | 第14页 |
| 3.1.2 来源于植物自身的组成型启动子 | 第14-15页 |
| 3.2 组织特异型启动子 | 第15-17页 |
| 3.2.1 花特异性表达启动子 | 第15-16页 |
| 3.2.2 果实特异性表达启动子 | 第16页 |
| 3.2.3 种子特异性表达启动子 | 第16-17页 |
| 3.3 诱导型启动子 | 第17-19页 |
| 3.3.1 盐诱导型启动子 | 第17-18页 |
| 3.3.2 光诱导型启动子 | 第18页 |
| 3.3.3 低温诱导型启动子 | 第18-19页 |
| 3.3.4 缺水诱导型启动子 | 第19页 |
| 4 PEAMT基因及其启动子 | 第19-21页 |
| 4.1 PEAMT基因 | 第19-20页 |
| 4.2 PEAMT启动子 | 第20-21页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第21页 |
| 6 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 辽宁碱蓬SlPEAMT基因启动子的分离及序列分析 | 第22-33页 |
| 1 实验材料 | 第22-23页 |
| 1.1 植物材料 | 第22页 |
| 1.2 菌株和质粒 | 第22页 |
| 1.3 试剂 | 第22页 |
| 1.4 培养基 | 第22页 |
| 1.5 引物 | 第22页 |
| 1.6 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.1 SlPEAMT基因启动子序列的获得 | 第23-25页 |
| 2.1.1 辽宁碱蓬总DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.1.2 引物设计 | 第24页 |
| 2.1.3 TAIL-PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.1.4 目标产物的回收与测序 | 第25页 |
| 2.2 SlPEAMT基因启动子序列分析 | 第25页 |
| 2.3 SlPEAMT基因启动子的克隆 | 第25-27页 |
| 2.3.1 启动子片段与pBackezero-T载体的连接与转化 | 第25-26页 |
| 2.3.2 阳性克隆的检测 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-30页 |
| 3.1 SlPEAMT基因启动子序列的获得 | 第27-29页 |
| 3.1.1 辽宁碱蓬总DNA的提取 | 第27页 |
| 3.1.2 TAIL-PCR扩增 | 第27-28页 |
| 3.1.3 目标产物的回收及测序 | 第28-29页 |
| 3.2 SlPEAMT基因启动子序列分析 | 第29-30页 |
| 3.3 SlPEAMT基因启动子的克隆 | 第30页 |
| 4 讨论 | 第30-32页 |
| 4.1 启动子序列获得的方法 | 第30-31页 |
| 4.2 SlPEAMT启动子 | 第31-32页 |
| 5 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 SlPEAMT基因启动子盐诱导功能分析 | 第33-55页 |
| 1 实验材料 | 第33-34页 |
| 1.1 植物材料 | 第33页 |
| 1.2 菌株 | 第33页 |
| 1.3 试剂 | 第33页 |
| 1.4 引物 | 第33页 |
| 1.5 培养基 | 第33页 |
| 1.6 仪器设备 | 第33-34页 |
| 2 实验方法 | 第34-43页 |
| 2.1 SlPEAMT启动子5’端缺失表达载体的构建 | 第34-38页 |
| 2.1.1 启动子5’端缺失片段的获得 | 第34-36页 |
| 2.1.2 各缺失片段与GUS基因融合表达载体的构建 | 第36-38页 |
| 2.2 启动子缺失载体转化根癌农杆菌 | 第38-39页 |
| 2.2.1 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第38页 |
| 2.2.2 冻融法转化根癌农杆菌 | 第38-39页 |
| 2.2.3 阳性菌落的PCR检测 | 第39页 |
| 2.3 缺失载体转化烟草 | 第39-40页 |
| 2.3.1 烟草叶片的预培养 | 第39页 |
| 2.3.2 农杆菌的培养 | 第39页 |
| 2.3.3 浸染 | 第39页 |
| 2.3.4 抗性芽的筛选及转基因植株在潮霉素中的生根培养 | 第39-40页 |
| 2.4 转基因烟草的检测 | 第40页 |
| 2.4.1 转基因植株的PCR检测 | 第40页 |
| 2.4.2 转基因植株的GUS组织化学染色检测 | 第40页 |
| 2.5 启动子不同区段盐诱导功能分析 | 第40-43页 |
| 2.5.1 转基因烟草无菌苗的培养及盐胁迫处理 | 第40-41页 |
| 2.5.2 GUS组织化学分析 | 第41页 |
| 2.5.3 GUS荧光定量分析 | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-52页 |
| 3.1 启动子5’端缺失表达载体的构建 | 第43-47页 |
| 3.1.1 SlPEAMT基因启动子5’端缺失片段的获得 | 第43-44页 |
| 3.1.2 各缺失片段与GUS基因融合表达载体的构建 | 第44-47页 |
| 3.2 启动子缺失载体转化根癌农杆菌 | 第47-48页 |
| 3.3 启动子缺失载体转化烟草 | 第48-49页 |
| 3.4 转基因烟草的检测 | 第49-50页 |
| 3.4.1 转基因植株的PCR检测 | 第49-50页 |
| 3.4.2 转基因植株的GUS组织化学染色检测 | 第50页 |
| 3.5 启动子不同区段盐诱导功能分析 | 第50-52页 |
| 3.5.1 GUS组织化学分析 | 第50-51页 |
| 3.5.2 GUS荧光定量分析 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 4.1 启动子功能研究方法 | 第52-53页 |
| 4.2 SlPEAMT启动子盐诱导功能分析 | 第53页 |
| 5 小结 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录A：MS培养基的配制 | 第60-61页 |
| 附录B：DNA Markers | 第61-62页 |
| 附录C：pCAMBIA1301质粒图谱 | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
