| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第15-65页 |
| 1.1 磷酸化蛋白组学简介 | 第15-16页 |
| 1.2 磷酸化肽段/蛋白预富集技术 | 第16-28页 |
| 1.2.1 免疫亲和富集法 | 第17-18页 |
| 1.2.2 化学衍生法 | 第18-20页 |
| 1.2.3 固定金属亲和色谱法(IMAC) | 第20-22页 |
| 1.2.4 金属氧化物亲和色谱法(MOAC) | 第22-25页 |
| 1.2.5 SIMAC技术 | 第25-27页 |
| 1.2.6 其它方法 | 第27-28页 |
| 1.2.6.1 磷酸钙沉淀法 | 第27页 |
| 1.2.6.2 羟基磷灰石用于磷酸化肽段富集 | 第27页 |
| 1.2.6.3 聚精氨酸用于多磷酸化肽段富集 | 第27-28页 |
| 1.3 磷酸化肽段分离技术 | 第28-32页 |
| 1.3.1 反相色谱 | 第28页 |
| 1.3.2 亲水相互作用色谱 | 第28-29页 |
| 1.3.3 离子交换色谱 | 第29-30页 |
| 1.3.4 静电排斥亲水作用色谱 | 第30-32页 |
| 1.4 磷酸化蛋白质/肽段检测技术 | 第32-42页 |
| 1.4.1 磷酸化蛋白质检测 | 第32-36页 |
| 1.4.1.1 ~(32)p放射性标记法 | 第32页 |
| 1.4.1.2 抗体免疫印迹检测法 | 第32-33页 |
| 1.4.1.3 荧光检测法 | 第33页 |
| 1.4.1.4 质谱检测法 | 第33-36页 |
| 1.4.2 磷酸化肽段识别 | 第36-38页 |
| 1.4.2.1 基于MALDI-TOF-MS的识别方法 | 第36-37页 |
| 1.4.2.2 基于串联质谱的识别方法 | 第37-38页 |
| 1.4.2.3 基于~(31)P检测的识别方法 | 第38页 |
| 1.4.3 磷酸化肽段序列及磷酸化位点的鉴定 | 第38-42页 |
| 1.4.3.1 Edman降解 | 第38-39页 |
| 1.4.3.2 串联质谱测序 | 第39-42页 |
| 1.5 论文选题依据、意义及研究内容 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-65页 |
| 第二章 氧化锆用于磷酸化肽段的富集与识别 | 第65-87页 |
| 2.1 前言 | 第65-66页 |
| 2.2 实验部分 | 第66-68页 |
| 2.2.1 试剂 | 第66页 |
| 2.2.2 磷酸化Tau蛋白的制备 | 第66页 |
| 2.2.3 ZrO_2及复合氧化物的制备 | 第66-67页 |
| 2.2.4 磷酸化肽溶液的制备 | 第67页 |
| 2.2.5 磷酸化肽的富集 | 第67-68页 |
| 2.2.6 仪器 | 第68页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第68-83页 |
| 2.3.1 ZrO_2应用于磷酸化肽的富集与去磷酸化 | 第68-71页 |
| 2.3.2 ZrO_2应用于蛋白酶解产物中磷酸化肽的富集与识别 | 第71-73页 |
| 2.3.3 ZrO_2应用于脱脂牛奶酶解产物中磷酸化肽的富集与识别 | 第73-75页 |
| 2.3.4 ZrO_2的表征和去磷酸化肽段机理探究 | 第75-77页 |
| 2.3.5 解吸条件的优化 | 第77-81页 |
| 2.3.6 ZrO_2应用于Tau蛋白酶解产物中磷酸化肽的富集与识别 | 第81-83页 |
| 2.4 结论 | 第83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 第三章 磷酸根改性二氧化硅涂层毛细管在磷酸化肽段富集中的应用 | 第87-107页 |
| 3.1 前言 | 第87-88页 |
| 3.2 实验部分 | 第88-92页 |
| 3.2.1 试剂 | 第88-89页 |
| 3.2.2 磷酸根改性纳米二氧化硅涂层毛细管的制备 | 第89-90页 |
| 3.2.3 多肽样品的制备 | 第90-91页 |
| 3.2.4 磷酸化肽段的富集 | 第91-92页 |
| 3.2.5 仪器 | 第92页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第92-100页 |
| 3.3.1 纳米二氧化硅涂层毛细管表征 | 第92-93页 |
| 3.3.2 NP-IMAC-Fe~(3+)、NP-IMAC-Zr~(4+)和NP-IMAC-Ti~(4+)的磷酸化萃取性能对比 | 第93-96页 |
| 3.3.3 NP-IMAC-Zr~(4+)的磷酸化萃取灵敏度考察 | 第96-97页 |
| 3.3.4 NP-IMAC-Zr~(4+)和IMAC-Zr~(4+)的磷酸化萃取能力的比较 | 第97-99页 |
| 3.3.5 NP-IMAC-Zr~(4+)的磷酸化萃取容量的考察 | 第99-100页 |
| 3.3.6 NP-IMAC-Zr~(4+)应用于低脂牛奶中磷酸化肽段的富集 | 第100页 |
| 3.4 结论 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-107页 |
| 第四章 液相沉积法制备二氧化钛包覆二氧化硅微球及其在磷酸化肽段富集与液相色谱中的应用 | 第107-134页 |
| 4.1 前言 | 第107-108页 |
| 4.2 实验部分 | 第108-111页 |
| 4.2.1 试剂 | 第108页 |
| 4.2.2 多肽样品的制备 | 第108-109页 |
| 4.2.3 二氧化钛涂覆二氧化硅微球(SiO_2-nLPD)的制备 | 第109页 |
| 4.2.4 C18键合SiO_2/SiO_2-3LPD的制备 | 第109-110页 |
| 4.2.5 磷酸化肽的富集 | 第110页 |
| 4.2.6 仪器 | 第110-111页 |
| 4.2.7 液相色谱条件 | 第111页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第111-128页 |
| 4.3.1 SiO_2-nLPD微球的表征 | 第111-115页 |
| 4.3.2 SiO_2-nLPD在磷酸化肽段富集中的应用 | 第115-121页 |
| 4.3.3 SiO_2-3LPD在磷酸腺苷分离中的应用 | 第121-124页 |
| 4.3.4 C18键合SiO_2-3LPD在反相液相色谱中的应用 | 第124-128页 |
| 4.4 结论 | 第128页 |
| 参考文献 | 第128-134页 |
| 第五章 二氧化钛涂覆介孔二氧化硅中空微球的制备及其在磷酸化肽段富集中的应用 | 第134-151页 |
| 5.1 前言 | 第134页 |
| 5.2 实验部分 | 第134-138页 |
| 5.2.1 试剂 | 第134-135页 |
| 5.2.2 多肤样品的制备 | 第135页 |
| 5.2.3 二氧化钛涂覆磁性介孔中空二氧化硅微球(TiO_2/MHMSS)的制备 | 第135-137页 |
| 5.2.3.1 介孔中空二氧化硅微球(HMSS)的制备 | 第136页 |
| 5.2.3.2 磁性介孔中空二氧化硅微球(MHMSS)的制备 | 第136-137页 |
| 5.2.3.3 二氧化钛涂覆磁性介孔中空二氧化硅微球TiO_2-1/MHMSS- | 第137页 |
| 5.2.3.4 二氧化钛涂覆磁性介孔中空二氧化硅微球TiO_2-2/MHMSS- | 第137页 |
| 5.2.4 磷酸化肽的富集 | 第137-138页 |
| 5.2.5 仪器 | 第138页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第138-147页 |
| 5.3.1 HMSS、MHMSS及TiO_2/MHMSS的表征 | 第138-144页 |
| 5.3.2 TiO_2/MHMSS在磷酸化肽段富集中的应用 | 第144-147页 |
| 5.4 结论 | 第147-148页 |
| 参考文献 | 第148-151页 |
| 第六章 聚(乙烯基膦酸-乙二醇二甲基丙烯酸酯)包覆四氧化三铁磁性纳米材料的制备及其在磷酸化肽段富集的应用 | 第151-173页 |
| 6.1 前言 | 第151-152页 |
| 6.2 实验部分 | 第152-157页 |
| 6.2.1 试剂 | 第152页 |
| 6.2.2 多肽样品的制备 | 第152-153页 |
| 6.2.3 磁性聚合物(Fe_3O_4@p(VPA-EDMA-x)-Zr~(4+))的制备 | 第153-154页 |
| 6.2.4 磷含量的检测 | 第154-155页 |
| 6.2.5 磷酸化肽段的富集 | 第155-156页 |
| 6.2.6 仪器 | 第156-157页 |
| 6.2.7 质谱数据分析 | 第157页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第157-169页 |
| 6.3.1 磁性聚合物的表征 | 第157-159页 |
| 6.3.2 磁性聚合物对磷酸化肽段富集能力考查 | 第159-162页 |
| 6.3.3 Fe_3O_4@p(VPA-EDMA-x)-Zr~(4+)对磷酸化肽段的富集能力与配体含量的关系 | 第162-167页 |
| 6.3.4 Fe_3O_4@p(VPA-EDMA-1)-Zr~(4+)对磷酸化肽段富集条件的优化 | 第167-168页 |
| 6.3.5 Fe_3O_4@p(VPA-EDMA-1)-Zr~(4+)对HeLa细胞裂解液的酶解产物中磷酸化肽段的富集 | 第168-169页 |
| 6.4 结论 | 第169页 |
| 参考文献 | 第169-173页 |
| 第七章 总结与展望 | 第173-175页 |
| 附录 | 第175-177页 |
| 致谢 | 第177-178页 |
