| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-22页 |
| 1.1 慢性肾脏病与甲状旁腺激素 | 第9-12页 |
| 1.1.1 慢性肾脏病概述 | 第9页 |
| 1.1.2 甲状旁腺激素概述 | 第9-10页 |
| 1.1.3 甲状旁腺激素的致病机理 | 第10-11页 |
| 1.1.4 临床上治疗肾衰竭患者体内高PTH的方法 | 第11-12页 |
| 1.2 纳米抗体 | 第12-17页 |
| 1.2.1 纳米抗体的结构特征 | 第12-13页 |
| 1.2.2 纳米抗体的理化性质 | 第13-14页 |
| 1.2.3 纳米抗体的应用 | 第14-16页 |
| 1.2.4 双价及多价纳米抗体 | 第16-17页 |
| 1.3 蛋白质固载技术 | 第17-20页 |
| 1.3.1 随机固载法 | 第18页 |
| 1.3.2 定向固载法 | 第18-19页 |
| 1.3.3 生物素-链霉素亲和素技术及在蛋白固载中的应用 | 第19-20页 |
| 1.4 本论文研究目的、内容和意义 | 第20-22页 |
| 2 定点生物素修饰双价抗PTH纳米抗体的制备 | 第22-50页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第22-26页 |
| 2.2.1 材料和试剂 | 第22-24页 |
| 2.2.2 主要仪器、耗材 | 第24-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.3.1 感受态细胞的制备及重组质粒的转化 | 第26-27页 |
| 2.3.2 重组纳米抗体的表达 | 第27页 |
| 2.3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和非变性凝胶电泳 | 第27-29页 |
| 2.3.4 菌体破碎 | 第29-30页 |
| 2.3.5 固定化金属离子亲和层析 | 第30-31页 |
| 2.3.6 BCA法测定蛋白浓度 | 第31-32页 |
| 2.3.7 重组蛋白纯度分析及回收率计算 | 第32页 |
| 2.3.8 超滤换液浓缩与纳米抗体的保存 | 第32-33页 |
| 2.3.9 ELISA检测纳米抗体活性 | 第33-34页 |
| 2.3.10 Biacore测定纳米抗体亲和力 | 第34-35页 |
| 2.3.11 纳米抗体的生物素催化 | 第35-36页 |
| 2.3.12 脱盐柱脱盐 | 第36页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第36-48页 |
| 2.4.1 现有五种抗PTH纳米抗体的生物学性质分析 | 第36-37页 |
| 2.4.2 定点生物素修饰的双价抗PTH纳米抗体的设计与构建 | 第37-39页 |
| 2.4.3 纳米抗体的表达 | 第39-40页 |
| 2.4.4 纳米抗体可溶性表达检测 | 第40-41页 |
| 2.4.5 固定化金属离子亲和层析 | 第41-44页 |
| 2.4.6 纳米抗体回收率计算及纯度分析 | 第44-45页 |
| 2.4.7 ELISA检测纳米抗体活性 | 第45-46页 |
| 2.4.8 Biacore测定纳米抗体亲和力 | 第46-47页 |
| 2.4.9 纳米抗体的生物素催化 | 第47-48页 |
| 2.5 小结 | 第48-50页 |
| 3 链霉亲和素的制备 | 第50-56页 |
| 3.1 引言 | 第50页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第50页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第50页 |
| 3.2.2 主要仪器及耗材 | 第50页 |
| 3.3 实验方法 | 第50-51页 |
| 3.3.1 链霉亲和素的表达 | 第50页 |
| 3.3.2 固定化金属离子亲和层析 | 第50页 |
| 3.3.3 链霉亲和素的活性测定 | 第50-51页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第51-55页 |
| 3.4.1 链霉亲和素的表达 | 第51-52页 |
| 3.4.2 链霉亲和素的纯化 | 第52-54页 |
| 3.4.3 链霉亲和素的活性测定 | 第54-55页 |
| 3.5 小结 | 第55-56页 |
| 4 免疫吸附剂的制备及吸附性能评价 | 第56-71页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验仪器与材料 | 第56-57页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第56页 |
| 4.2.2 主要仪器及耗材 | 第56-57页 |
| 4.3 实验方法 | 第57-61页 |
| 4.3.1 四种免疫吸附剂的制备 | 第57-59页 |
| 4.3.2 环氧基密度、氨基密度的测定方法 | 第59-60页 |
| 4.3.3 免疫吸附剂的等温吸附评价 | 第60页 |
| 4.3.4 免疫吸附剂对PTH的特异性吸附评价 | 第60页 |
| 4.3.5 免疫吸附剂对血浆中PTH的吸附能力考察 | 第60-61页 |
| 4.3.6 ELISA检测Nb1-Nb2与Nb1对血浆蛋白的非特异性作用 | 第61页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第61-70页 |
| 4.4.1 四种免疫吸附剂的合成 | 第61页 |
| 4.4.2 免疫吸附剂对PTH的等温吸附评价 | 第61-66页 |
| 4.4.3 免疫吸附剂对PTH的特异性吸附评价 | 第66-67页 |
| 4.4.4 免疫吸附剂对血浆中PTH吸附能力考察 | 第67-70页 |
| 4.5 小结 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 附录A Nb1-Nb2基因序列及蛋白序列 | 第77-78页 |
| 附录B Nb1基因序列及蛋白序列 | 第78-79页 |
| 附录C 链霉亲和素基因序列及蛋白序列 | 第79-80页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
