| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-26页 |
| 1.1 β2 微球蛋白概述 | 第9-11页 |
| 1.1.1 β2 微球蛋白简介 | 第9页 |
| 1.1.2 β2 微球蛋白与相关疾病 | 第9-11页 |
| 1.1.3 β2 微球蛋白在临床诊断上的应用 | 第11页 |
| 1.2 β2 微球蛋白的临床检测方法 | 第11-17页 |
| 1.2.1 放射免疫分析法 | 第11-12页 |
| 1.2.2 免疫比浊法 | 第12-13页 |
| 1.2.3 酶联免疫吸附测定 | 第13-14页 |
| 1.2.4 化学发光免疫分析 | 第14-16页 |
| 1.2.5 时间分辨荧光免疫分析法 | 第16页 |
| 1.2.6 β2 微球蛋白的不同临床检测方法对比 | 第16-17页 |
| 1.3 纳米抗体技术 | 第17-25页 |
| 1.3.1 纳米抗体简介 | 第17-19页 |
| 1.3.2 纳米抗体的固载技术 | 第19-23页 |
| 1.3.3 生物素-链霉亲和素定点固载技术 | 第23-24页 |
| 1.3.4 纳米抗体在体外免疫检测领域的应用 | 第24-25页 |
| 1.4 本论文的研究目的、内容及意义 | 第25-26页 |
| 2 抗 β2M纳米抗体的制备及其活性表征 | 第26-43页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第26-29页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第26-28页 |
| 2.2.2 主要仪器及耗材 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-35页 |
| 2.3.1 纳米抗体重组表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.2 重组质粒转化感受态细胞 | 第30-31页 |
| 2.3.3 可溶表达重组菌株的筛选与纳米抗体的表达 | 第31-32页 |
| 2.3.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.3.5 金属离子螯合层析 | 第32-33页 |
| 2.3.6 蛋白浓度和纯度的测定 | 第33-34页 |
| 2.3.7 ELISA法检测抗 β2M纳米抗体的抗原结合活性 | 第34页 |
| 2.3.8 Biacore测定抗 β2M纳米抗体的平衡解离常数 | 第34-35页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第35-41页 |
| 2.4.1 重组质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4.2 可溶表达重组菌的筛选 | 第36-38页 |
| 2.4.3 金属离子螯合层析 | 第38-40页 |
| 2.4.4 ELISA法检测抗 β2M纳米抗体的抗原结合活性 | 第40-41页 |
| 2.4.5 Biacore测定抗 β2M纳米抗体的平衡解离常数 | 第41页 |
| 2.5 小结 | 第41-43页 |
| 3 BirA酶的制备及纳米抗体的生物素化修饰 | 第43-57页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第43-45页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第43-44页 |
| 3.2.2 主要仪器及耗材 | 第44-45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-49页 |
| 3.3.1 BirA酶重组表达菌株的构建 | 第45页 |
| 3.3.2 BirA重组菌株的诱导表达 | 第45-46页 |
| 3.3.3 金属离子螯合层析 | 第46页 |
| 3.3.4 抗 β2M纳米抗体的生物素化反应 | 第46页 |
| 3.3.5 不同NaCl浓度对生物素化反应的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.6 ELISA法检测生物化纳米抗体的活性 | 第47页 |
| 3.3.7 HABA法测定BirA酶的活力与比活力 | 第47-48页 |
| 3.3.8 BirA酶添加量的优化 | 第48-49页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第49-55页 |
| 3.4.1 BirA重组菌株的诱导表达 | 第49页 |
| 3.4.2 金属离子螯合层析 | 第49-50页 |
| 3.4.3 抗 β2M纳米抗体的生物素化反应 | 第50-51页 |
| 3.4.4 不同NaCl浓度对生物素化反应的影响 | 第51-53页 |
| 3.4.5 BirA酶活力与比活力的检测 | 第53-54页 |
| 3.4.6 BirA酶的添加量的优化 | 第54-55页 |
| 3.5 小结 | 第55-57页 |
| 4 生物素化纳米抗体用于ELISA法检测 β2M的效果研究 | 第57-69页 |
| 4.1 引言 | 第57页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第57-58页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第57页 |
| 4.2.2 主要仪器及耗材 | 第57-58页 |
| 4.3 实验方法 | 第58-61页 |
| 4.3.1 基于生物素-链霉亲和素的ELISA检测体系的建立 | 第58页 |
| 4.3.2 基于定向固载纳米抗体的ELISA检测体系的建立 | 第58-59页 |
| 4.3.3 β2M标准曲线的测定 | 第59页 |
| 4.3.4 β2M检测下限的测定 | 第59-60页 |
| 4.3.5 准确度实验 | 第60页 |
| 4.3.6 血清IgG、HSA对ELISA检测的影响 | 第60-61页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第61-68页 |
| 4.4.1 基于生物素-链霉亲和素的ELISA检测体系的建立 | 第61-62页 |
| 4.4.2 基于定向固载纳米抗体的ELISA检测体系的建立 | 第62-64页 |
| 4.4.3 β2M标准曲线的测定 | 第64-65页 |
| 4.4.4 β2M检测下限的测定 | 第65页 |
| 4.4.5 准确度实验 | 第65-67页 |
| 4.4.6 血清IgG、HSA对ELISA检测的影响 | 第67-68页 |
| 4.5 小结 | 第68-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 附录A 抗 β2M纳米抗体的序列信息 | 第77-78页 |
| 附录B BirA酶的序列信息 | 第78-79页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
