| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 RNA干扰技术 | 第12-13页 |
| 1.1.1 RNAi沉默机制 | 第12页 |
| 1.1.2 RNAi的特点 | 第12-13页 |
| 1.2 RNAi在肿瘤治疗中的应用 | 第13-15页 |
| 1.2.1 RNAi对癌基因的作用 | 第13-14页 |
| 1.2.2 RNAi抑制肿瘤的抗凋亡基因 | 第14页 |
| 1.2.3 RNAi抑制肿瘤血管的生成 | 第14页 |
| 1.2.4 RNAi降低肿瘤的耐药性 | 第14-15页 |
| 1.3 核酶开关与RNAi的调控 | 第15-19页 |
| 1.3.1 适配体 | 第15-16页 |
| 1.3.2 核酶开关 | 第16-17页 |
| 1.3.3 核酶开关调控基因的表达 | 第17-18页 |
| 1.3.4 核酶开关调控RNAi的发生 | 第18-19页 |
| 1.4 自组装RNA纳米载体与RNAi的递送 | 第19-21页 |
| 1.4.1 自组装系统介导的siRNA递送 | 第19-20页 |
| 1.4.2 适配体靶向介导的siRNA递送 | 第20-21页 |
| 1.5 课题研究的目的和内容 | 第21-22页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第21页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 茶碱适配体响应的HDV核酶开关调控RNAi的发生 | 第22-43页 |
| 2.1 引言 | 第22-23页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第23-26页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.3 主要试剂的配制 | 第24-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.3.1 核酶开关平台的设计原理 | 第26-27页 |
| 2.3.2 siRNA的引物设计 | 第27-28页 |
| 2.3.3 PCR反应及纯化 | 第28页 |
| 2.3.4 质粒DNA的转化 | 第28-29页 |
| 2.3.5 阳性对照组质粒的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.6 重组质粒载体的验证 | 第30-31页 |
| 2.3.7 细胞培养 | 第31页 |
| 2.3.8 细胞转染 | 第31-32页 |
| 2.3.9 细胞荧光成像与定量 | 第32页 |
| 2.3.10 实时定量PCR | 第32-34页 |
| 2.3.11 蛋白质免疫印迹法（western blot） | 第34-35页 |
| 2.3.12 流式细胞仪检测细胞的凋亡 | 第35-36页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第36-42页 |
| 2.4.1 核酶开关质粒的构建 | 第36-37页 |
| 2.4.2 茶碱配体依赖的核酶开关激活RNAi | 第37-39页 |
| 2.4.3 茶碱诱导的RNAi调控内源性基因MAP4K4的表达在哺乳细胞中 | 第39-41页 |
| 2.4.4 核酶开关调控MAP4K4基因下调促进HepG2细胞的凋亡 | 第41-42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-43页 |
| 第三章 自组装的适配体靶向的纳米载体用于siRNA的递送 | 第43-56页 |
| 3.1 引言 | 第43-44页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第44-45页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第44页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第44-45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-49页 |
| 3.3.1 DNA的合成 | 第45页 |
| 3.3.2 RNAi微载体的自组装过程 | 第45-46页 |
| 3.3.3 RNAi微米球/DNA-Chol/AS1411-DNA的杂交 | 第46页 |
| 3.3.4 RNAi微纳球的凝胶电泳、SEM观察和DLS测定 | 第46-47页 |
| 3.3.5 细胞培养 | 第47页 |
| 3.3.6 AS1411适配体依赖的细胞内成像 | 第47-48页 |
| 3.3.7 Bcl-2 的基因沉默实验 | 第48-49页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第49-55页 |
| 3.4.1 自组装RNAi纳米载体的设计与合成 | 第49-50页 |
| 3.4.2 自组装RNAi载体的结构表征 | 第50-52页 |
| 3.4.3 AS1411适配体依赖的细胞结合和摄取 | 第52页 |
| 3.4.4 AS1411适配体依赖的RNAi-NS沉默Bcl-2 基因的表达 | 第52-55页 |
| 3.5 本章小节 | 第55-56页 |
| 第四章 全文总结与展望 | 第56-58页 |
| 4.1 总结 | 第56页 |
| 4.2 展望 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 作者在攻读硕士学位期间公开发表的论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
