金黄色葡萄球菌多重PCR和基因芯片检测方法的建立
| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 1. 绪论 | 第11-19页 |
| 1.1 金黄色葡萄球菌 | 第11-13页 |
| 1.1.1 金黄色葡萄球菌的生物学特性 | 第11页 |
| 1.1.2 金黄色葡萄球菌的危害 | 第11-12页 |
| 1.1.3 金黄色葡萄球菌的毒力因子 | 第12-13页 |
| 1.2 金黄色葡萄球菌检测方法及研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.1 传统生化检测法 | 第13-14页 |
| 1.2.2 免疫学方法 | 第14-15页 |
| 1.2.3 分子生物学方法 | 第15-16页 |
| 1.3 用于金黄色葡萄球菌检测的常见基因 | 第16-19页 |
| 1.3.1 金黄色葡萄球菌属特异性基因 | 第16页 |
| 1.3.2 金黄色葡萄球菌的抗生素抗性基因 | 第16-19页 |
| 2. 金黄色葡萄球菌多重PCR 检测方法的建立 | 第19-31页 |
| 2.1 材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第19-20页 |
| 2.1.2 主要试剂及仪器 | 第20页 |
| 2.1.3 引物选择 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-23页 |
| 2.2.1 DNA 的制备 | 第21-22页 |
| 2.2.2 引物特异性验证 | 第22页 |
| 2.2.3 PCR 反应体系的优化 | 第22-23页 |
| 2.2.4 灵敏度试验 | 第23页 |
| 2.2.5 抗干扰试验及人工污染试验 | 第23页 |
| 2.2.6 多重PCR 方法有效性验证 | 第23页 |
| 2.3 结果 | 第23-27页 |
| 2.3.1 PCR 反应体系的优化 | 第23-25页 |
| 2.3.2 引物特异性验证 | 第25页 |
| 2.3.3 DNA 灵敏度 | 第25-26页 |
| 2.3.4 抗干扰试验及人工污染试验 | 第26页 |
| 2.3.5 多重PCR 方法的验证 | 第26-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-31页 |
| 3. 金黄色葡萄球菌基因芯片检测方法的建立 | 第31-45页 |
| 3.1 概述 | 第31-34页 |
| 3.1.1 基因芯片的原理 | 第31页 |
| 3.1.2 制作基因芯片的技术 | 第31-33页 |
| 3.1.3 基因芯片在致病菌检测方面的应用 | 第33-34页 |
| 3.2 材料 | 第34-39页 |
| 3.2.1 供试菌株 | 第34页 |
| 3.2.2 仪器设备 | 第34-35页 |
| 3.2.3 芯片引物与探针 | 第35-38页 |
| 3.2.4 试剂 | 第38-39页 |
| 3.3 方法 | 第39-41页 |
| 3.3.1 DNA 提取 | 第39页 |
| 3.3.2 多重PCR 的反应体系 | 第39页 |
| 3.3.3 PCR 产物纯化 | 第39页 |
| 3.3.4 点制芯片 | 第39-40页 |
| 3.3.5 芯片杂交和洗片 | 第40页 |
| 3.3.6 芯片扫描和数据分析 | 第40-41页 |
| 3.3.7 PCR 退火温度和荧光标记温度优化 | 第41页 |
| 3.3.8 芯片检测特异性 | 第41页 |
| 3.3.9 芯片检测灵敏度 | 第41页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第41-45页 |
| 3.4.1 PCR 退火温度和荧光标记温度优化 | 第41页 |
| 3.4.2 芯片检测特异性 | 第41-43页 |
| 3.4.3 芯片检测灵敏度 | 第43-45页 |
| 4. 总结与展望 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第56-58页 |
