| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 1 文献综述 | 第9-18页 |
| 1.1 丝状真菌的多样性 | 第9页 |
| 1.2 黄曲霉菌概述 | 第9-10页 |
| 1.2.1 黄曲霉的生物学特征 | 第9页 |
| 1.2.2 黄曲霉毒素及危害 | 第9-10页 |
| 1.2.3 黄曲霉毒素的生物防治 | 第10页 |
| 1.3 丝状真菌遗传转化方法的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.3.1 PEG-CaCl_2介导的原生质体转化 | 第11页 |
| 1.3.2 电激转化法 | 第11页 |
| 1.3.3 限制性内切酶介导转化法 | 第11-12页 |
| 1.4 根癌农杆菌介导丝状真菌遗传转化的研究进展 | 第12-18页 |
| 1.4.1 根癌农杆菌的生物学特征 | 第12页 |
| 1.4.2 农杆菌介导真菌遗传转化的分子机制 | 第12-13页 |
| 1.4.3 农杆菌介导真菌遗传转化的过程 | 第13-14页 |
| 1.4.4 根癌农杆菌介导丝状真菌转化的优点 | 第14-15页 |
| 1.4.5 影响农杆菌介导丝状真菌遗传转化效率的因素 | 第15-16页 |
| 1.4.6 根癌农杆菌介导真菌遗传转化的研究意义 | 第16-18页 |
| 2 引言 | 第18-19页 |
| 2.1 研究的目的与意义 | 第18页 |
| 2.2 研究的内容 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-27页 |
| 3.1 菌种与质粒 | 第19页 |
| 3.2 培养基 | 第19-20页 |
| 3.3 酶与试剂 | 第20页 |
| 3.4 主要仪器设备 | 第20页 |
| 3.5 实验方法与步骤 | 第20-27页 |
| 3.5.1 菌种的生长和保存 | 第20-21页 |
| 3.5.2 抑制根癌农杆菌AGL-1 生长所需头孢霉素（Cef）的浓度确定 | 第21-22页 |
| 3.5.3 黄曲霉对不同抗生素的敏感实验 | 第22页 |
| 3.5.4 黄曲霉对Cef的敏感性实验 | 第22页 |
| 3.5.5 引物设计 | 第22页 |
| 3.5.6 博来霉素抗性基因的PCR扩增及测序 | 第22-23页 |
| 3.5.7 双元表达载体pDHBle的构建 | 第23-24页 |
| 3.5.8 根癌农杆菌AGL-1 感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 3.5.9 冻融法转化根癌农杆菌AGL-1 | 第24页 |
| 3.5.10 黄曲霉孢子的原生质体制备及再生 | 第24-25页 |
| 3.5.11 黄曲霉分生孢子的培养 | 第25页 |
| 3.5.12 农杆菌AGL-1 的活化和诱导培养 | 第25页 |
| 3.5.13 农杆菌介导黄曲霉菌的遗传转化步骤 | 第25-26页 |
| 3.5.14 微波法初步验证转化子 | 第26页 |
| 3.5.15 黄曲霉基因组DNA的大量提取 | 第26页 |
| 3.5.16 转化子基因组的PCR验证 | 第26页 |
| 3.5.17 转化子的遗传稳定性实验 | 第26-27页 |
| 4 结果与分析 | 第27-38页 |
| 4.1 黄曲霉对不同抗生素的敏感性 | 第27-28页 |
| 4.2 ATMT双元表达载体pDHBle的构建 | 第28-31页 |
| 4.2.1 双元表达载体pDHBle构建流程图 | 第28-30页 |
| 4.2.2 载体pANBle的构建 | 第30-31页 |
| 4.2.3 载体pDHBle的构建 | 第31页 |
| 4.3 表达载体pDHBle转化农杆菌 | 第31-32页 |
| 4.4 黄曲霉菌孢子原生质体制备及其再生效率 | 第32-34页 |
| 4.4.1 黄曲霉孢子的原生质体形态 | 第32页 |
| 4.4.2 酶液浓度对黄曲霉孢子的原生质体制备和再生的影响 | 第32页 |
| 4.4.3 酶解时间对黄曲霉孢子的原生质体制备和再生的影响 | 第32-33页 |
| 4.4.4 酶解温度对黄曲霉孢子的原生质体制备和再生的影响 | 第33-34页 |
| 4.5 根癌农杆菌介导黄曲霉菌遗传转化体系的初步研究 | 第34-38页 |
| 4.5.1 抑制根癌农杆菌AGL-1 所需头孢噻肟钠浓度的确定 | 第34页 |
| 4.5.2 黄曲霉对Cef的敏感性 | 第34-35页 |
| 4.5.3 不同温度情况下黄曲霉孢子的萌发实验 | 第35页 |
| 4.5.4 温度对黄曲霉菌遗传转化的影响 | 第35-36页 |
| 4.5.5 共培养时间对黄曲霉菌遗传转化的影响 | 第36页 |
| 4.5.6 农杆菌浓度对黄曲霉遗传转化的影响 | 第36页 |
| 4.5.7 转化子的PCR检测 | 第36-37页 |
| 4.5.8 转化子的稳定性检测 | 第37-38页 |
| 5 讨论 | 第38-40页 |
| 5.1 筛选标记的选择 | 第38页 |
| 5.2 农杆菌介导黄曲霉孢子的遗传转化体系的初步建立 | 第38-40页 |
| 6 结论 | 第40-41页 |
| 7 参考文献 | 第41-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 个人简介 | 第48-49页 |
| 硕士期间论文发表情况 | 第49页 |
