| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词 | 第13-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-49页 |
| 第一章 泛素蛋白酶体途径研究进展 | 第16-48页 |
| 1 泛素化系统的组成与基本特点 | 第17-25页 |
| 1.1 泛素 | 第17-18页 |
| 1.2 靶蛋白底物 | 第18-19页 |
| 1.3 泛素化连接级联反应 | 第19-25页 |
| 2 26S蛋白酶体 | 第25-27页 |
| 3 去泛素化酶 | 第27页 |
| 4 泛素-蛋白酶体途径的生理功能 | 第27-44页 |
| 4.1 UPP途径与肿瘤 | 第27-29页 |
| 4.2 UPP途径与光形态建成 | 第29-30页 |
| 4.3 UPP途径与叶绿体蛋白周转 | 第30-31页 |
| 4.4 UPP途径与植物激素信号通路 | 第31-35页 |
| 4.5 UPP途径与细胞周期调控 | 第35-36页 |
| 4.6 UPP途径与逆境胁迫 | 第36-43页 |
| 4.7 UPP途径与植物抗病 | 第43-44页 |
| 5 作物综合逆境适应性研究 | 第44-45页 |
| 6 泛素-蛋白酶体途径的研究方法、技术及展望 | 第45-48页 |
| 研究目的与意义 | 第48-49页 |
| 第二部分 研究报告 | 第49-104页 |
| 第二章 大GmRFP1基因的分离与鉴定 | 第50-63页 |
| 1 材料与方法 | 第50-55页 |
| 1.1 植物材料 | 第50-51页 |
| 1.2 大豆总DNA的提取 | 第51页 |
| 1.3 大豆RNA的提取和纯化 | 第51-52页 |
| 1.4 cDNA第一链的合成 | 第52-53页 |
| 1.5 GmRFP1 5'基因片段的克隆 | 第53页 |
| 1.6 cDNA 3'末端序列的快速扩增 | 第53-54页 |
| 1.7 GmRFP1 cDNA和基因组全长序列的克隆 | 第54页 |
| 1.8 GmRFP1基因序列分析 | 第54-55页 |
| 1.9 系统进化分析 | 第55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-62页 |
| 2.1 GmRFP1基因的克隆 | 第55-56页 |
| 2.2 GmRFP1序列分析与蛋白的结构预测 | 第56-58页 |
| 2.3 多序列比对与系统发生分析 | 第58-60页 |
| 2.4 GmRFP1的基因结构分析 | 第60-62页 |
| 3 讨论 | 第62-63页 |
| 第三章 大GmRFP1基因的表达与功能分析 | 第63-93页 |
| 1 材料与方法 | 第63-76页 |
| 1.1 植物材料 | 第63页 |
| 1.2 菌株、载体、酶类及试剂 | 第63-64页 |
| 1.3 DNA的提取 | 第64页 |
| 1.4 RNA的提取和纯化 | 第64页 |
| 1.5 cDNA第一链的合成 | 第64页 |
| 1.6 半定量RT-PCR分析 | 第64页 |
| 1.7 实时定量RT-PCR分析 | 第64-65页 |
| 1.8 大GmRFP1基因原核表达载体的构建 | 第65页 |
| 1.9 大豆GmRFP1T蛋白的表达与纯化 | 第65-67页 |
| 1.10 GmRFP1突变体表达载体的构建及蛋白的表达与纯化 | 第67-68页 |
| 1.11 E3泛素连接酶反应 | 第68页 |
| 1.12 E3泛素连接酶活性的Western blot分析 | 第68-69页 |
| 1.13 转基因植物表达载体的构建 | 第69-70页 |
| 1.14 转基因烟草植株的获得 | 第70-72页 |
| 1.15 转基因烟草植株的分子检测 | 第72-73页 |
| 1.16 转基因烟草植株的胁迫处理 | 第73页 |
| 1.17 转基因烟草蛋白的差异蛋白质组分析 | 第73-76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-89页 |
| 2.1 GmRFP1基因组织表达和胁迫诱导表达分析 | 第76-78页 |
| 2.2 GmRFP1重组蛋白的表达与纯化 | 第78-81页 |
| 2.3 GmRFP1融合蛋白具有E3泛素连接酶活性 | 第81-82页 |
| 2.4 GmRFP1基因在烟草中的表达 | 第82-87页 |
| 2.5 转基因烟草叶片的差异蛋白质组分析 | 第87-89页 |
| 3 讨论 | 第89-93页 |
| 3.1 GmRFP1是ABA和冷、干旱、盐胁迫应答基因 | 第89-90页 |
| 3.2 GmRFP1蛋白RING结构域的保守氨基酸为其E3连接酶活性所必需 | 第90页 |
| 3.3 GmRFP1基因可能是ABA信号转导途径和低温胁迫信号通路的负调节因子 | 第90页 |
| 3.4 GmRFP1参与低温胁迫应答的调控机制的推测 | 第90-93页 |
| 第四章 大豆泛素结合酶基因的克隆与初步功能分析 | 第93-104页 |
| 1 材料与方法 | 第93-96页 |
| 1.1 植物材料 | 第93页 |
| 1.2 菌株、载体、酶类及试剂 | 第93-94页 |
| 1.3 大豆RNA的提取和纯化 | 第94页 |
| 1.4 cDNA第一链的合成 | 第94页 |
| 1.5 GmUBC同源基因的克隆 | 第94页 |
| 1.6 GmUBCc517与GmUBCc171基因序列分析 | 第94-95页 |
| 1.7 半定量RT-PCR分析 | 第95页 |
| 1.8 实时定量RT-PCR分析 | 第95页 |
| 1.9 大豆GmUBC基因原核表达载体的构建 | 第95页 |
| 1.10 大豆GmUBC蛋白的表达与纯化 | 第95页 |
| 1.11 GmUBCcs蛋白参加的多聚泛素化反应 | 第95-96页 |
| 1.12 泛素结合酶活性的Western blot分析 | 第96页 |
| 2 结果与分析 | 第96-101页 |
| 2.1 GmUBCc571和GmUBCc171基因的克隆 | 第96页 |
| 2.2 GmUBCc同源基因编码蛋白的序列分析 | 第96-98页 |
| 2.3 GmUBCc同源基因组织表达分析 | 第98页 |
| 2.4 GmUBCc同源基因胁迫诱导表达分析 | 第98-99页 |
| 2.5 重组蛋白的表达与纯化 | 第99-101页 |
| 2.6 融合蛋白具有E2泛素结合酶活性 | 第101页 |
| 3 讨论 | 第101-104页 |
| 全文结论 | 第104-106页 |
| 本研究创新之处 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-126页 |
| 附录 | 第126-134页 |
| 致谢 | 第134-136页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第136页 |
