| 目录 | 第3-7页 |
| 缩略语表(按字母顺序) | 第7-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| 英文摘要(Abstract) | 第11-14页 |
| (一) 前言 | 第15-19页 |
| (二) 材料与方法 | 第19-31页 |
| 1. 实验动物与分组 | 第19页 |
| 2. 试剂来源 | 第19-20页 |
| 3. 仪器设备 | 第20-21页 |
| 4. 实验方法 | 第21-30页 |
| 4.1 大鼠左侧大脑中动脉线栓(MCAO)模型 | 第21页 |
| 4.2 质粒的抽提和鉴定 | 第21-22页 |
| 4.2.1 质粒大量抽提 | 第21-22页 |
| 4.2.2 酶切鉴定质粒 | 第22页 |
| 4.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第22页 |
| 4.3 纹状体内质粒注射 | 第22-23页 |
| 4.4 侧脑室内质粒注射 | 第23页 |
| 4.5 BrdU注射 | 第23页 |
| 4.6 冰冻组织切片的制备 | 第23页 |
| 4.7 脑片的选取 | 第23-24页 |
| 4.8 免疫组织化学标记 | 第24-25页 |
| 4.8.1 BrdU免疫组织化学标记 | 第24页 |
| 4.8.2 免疫组织化学单标记(GFP、Pax6、RFP) | 第24页 |
| 4.8.3 免疫组织化学双标记 | 第24-25页 |
| 4.8.3.1 BrdU和GFP的免疫组织化学双标记 | 第24页 |
| 4.8.3.2 Pax6和GFP的免疫组织化学双标记 | 第24-25页 |
| 4.8.3.3 DCX和vWF的免疫组织化学双标记 | 第25页 |
| 4.9 免疫荧光标记和激光共聚焦扫描技术 | 第25-27页 |
| 4.9.1 免疫荧光单标记(vWF、GFP) | 第25页 |
| 4.9.2 免疫荧光双标记 | 第25-26页 |
| 4.9.2.1 GFP与nestin/Tuj-1/MAP-2/DCX/GAD67/D2L/NR1的免疫荧光双标记 | 第25-26页 |
| 4.9.2.2 GFP与ChAT/CD34的免疫荧光双标记 | 第26页 |
| 4.9.2.3 GFP与Sox2/Pax6/Oligo2的免疫荧光双标记 | 第26页 |
| 4.9.3 免疫荧光三标记 | 第26页 |
| 4.9.3.1 NeuN、vWF与GFAP的免疫荧光三标记 | 第26页 |
| 4.9.3.2 GFP、vWF与CD133的免疫荧光三标记 | 第26页 |
| 4.9.4 激光共聚焦扫描技术 | 第26-27页 |
| 4.10 膜片钳技术 | 第27页 |
| 4.10.1 大鼠纹状体脑片的制备 | 第27页 |
| 4.10.2 定位和细胞选取 | 第27页 |
| 4.11 海马及皮层原代神经元培养 | 第27-29页 |
| 4.11.1 胎鼠的选择 | 第27页 |
| 4.11.2 培养用液的选择 | 第27页 |
| 4.11.3 培养步骤 | 第27-29页 |
| 4.12 免疫细胞化学及免疫荧光 | 第29页 |
| 4.13 免疫印迹(Western blot) | 第29-30页 |
| 4.13.1 细胞总蛋白的制备 | 第29页 |
| 4.13.2 Western blot | 第29-30页 |
| 4.14 免疫沉淀(IP) | 第30页 |
| 5. 细胞计数 | 第30页 |
| 6. 数据的分析与统计 | 第30-31页 |
| (三) 实验结果 | 第31-40页 |
| 1. 缺血脑内神经元新生与血管构成之间存在密切联系 | 第31-32页 |
| 1.1 缺血损伤诱导纹状体血管增生 | 第31页 |
| 1.2 缺血损伤诱导纹状体神经元新生 | 第31页 |
| 1.3 缺血损伤诱导的神经元新生与血管构成之间有密切的联系 | 第31-32页 |
| 1.4 缺血损伤脑内神经血管单元的重塑 | 第32页 |
| 2. 缺血脑内内皮来源的细胞参与神经元新生 | 第32-37页 |
| 2.1 pTIE2-GFP在脑内表达相应的蛋白 | 第32-33页 |
| 2.2 pTIE2-GFP能示踪内皮来源的细胞 | 第33页 |
| 2.3 缺血脑内GFP~+细胞能转化为神经干细胞 | 第33页 |
| 2.4 缺血脑内GFP~+细胞能表达神经发生相关的转录因子Pax6 | 第33-34页 |
| 2.5 内皮来源的GFP~+细胞不参与缺血诱导的胶质再生 | 第34页 |
| 2.6 缺血脑内GFP~+细胞能分化为幼稚神经元 | 第34页 |
| 2.7 缺血脑内GFP~+细胞能分化为成熟神经元 | 第34-35页 |
| 2.8 缺血脑内GFP~+内皮来源细胞具有时间依赖的神经元新生 | 第35页 |
| 2.9 GFP~+细胞参与缺血纹状体内γ-氨基丁酸能和胆碱能神经元再生 | 第35-36页 |
| 2.10 缺血脑内内皮来源的神经元随时间推移逐渐发育成熟 | 第36页 |
| 2.11 缺血脑内GFP~+细胞具有神经元的电生理活性 | 第36-37页 |
| 3. 缺血脑内过表达VEGF促进内皮来源GFP~+细胞的转分化 | 第37-38页 |
| 3.1 phVEGF-DsRed和pDsRed在缺血脑内表达相应的蛋白 | 第37页 |
| 3.2 缺血脑内过表达VEGF增加GFP~+细胞数量 | 第37-38页 |
| 3.3 缺血脑内过表达VEGF促进GFP~+细胞参与的神经元新生 | 第38页 |
| 4. VEGF对神经元功能的调节作用 | 第38-40页 |
| 4.1 原代培养的神经元能表达VEGF及其受体 | 第38-39页 |
| 4.2 海马神经元能合成和释放VEGF | 第39页 |
| 4.3 VEGF促进原代培养的神经元中突触囊泡蛋白的磷酸化 | 第39页 |
| 4.4 VEGF通过受体作用促进神经元突触囊泡蛋白的磷酸化 | 第39-40页 |
| (四) 讨论 | 第40-48页 |
| 1. 缺血损伤脑内的血管重塑与神经元新生的关系 | 第40-44页 |
| 1.1 缺血损伤诱导的神经元新生 | 第40-41页 |
| 1.2 缺血脑内的血管重塑 | 第41-42页 |
| 1.3 缺血脑内的血管增生与神经元新生之间的联系 | 第42-44页 |
| 2 神经血管单元在缺血损伤修复中的意义 | 第44-45页 |
| 2.1 神经血管单元与缺血损伤修复的关系 | 第44-45页 |
| 2.2 神经血管单元重构在缺血诱导的神经元新生过程中的重要性 | 第45页 |
| 3. VEGF对缺血损伤诱导的神经血管单元重构的作用及机制分析 | 第45-48页 |
| 3.1 VEGF对缺血损伤诱导的神经元新生的影响 | 第45-46页 |
| 3.2 VEGF促进神经元新生机制的探讨 | 第46页 |
| 3.3 VEGF对神经血管单元重构的作用及机制探讨 | 第46-48页 |
| (五) 小结与结论 | 第48-49页 |
| 小结 | 第48页 |
| 结论与创新点 | 第48-49页 |
| (六) 图版说明 | 第49-62页 |
| (七) 参考文献 | 第62-68页 |
| 综述 | 第68-80页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 附录 | 第80-83页 |
| 附件一：/?77￡2-GFP质粒大量抽提的酶切鉴定结果 | 第80-81页 |
| 附件二 ：致谢 | 第81-82页 |
| 附录三：研究生期间发表及完成论文 | 第82-83页 |
