| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 立题背景及意义 | 第11-12页 |
| 1.2 克罗诺杆菌简介 | 第12-13页 |
| 1.2.1 克罗诺杆菌的生理特征 | 第12页 |
| 1.2.2 克罗诺杆菌耐热耐酸性 | 第12-13页 |
| 1.2.3 克罗诺杆菌毒力研究和传播途径 | 第13页 |
| 1.3 克罗诺杆菌分种方法研究进展 | 第13-16页 |
| 1.3.1 克罗诺杆菌传统生理生化分种方法 | 第13页 |
| 1.3.2 克罗诺杆菌分子生物学分种方法 | 第13-16页 |
| 1.4 荧光定量PCR技术及应用 | 第16-17页 |
| 1.4.1 荧光定量PCR技术简介 | 第16页 |
| 1.4.2 荧光定量PCR反应的实验原理 | 第16页 |
| 1.4.3 荧光定量PCR技术的应用 | 第16-17页 |
| 1.5 探针和引物设计 | 第17-18页 |
| 1.5.1 探针设计原则 | 第17页 |
| 1.5.2 探针荧光标记基团组合 | 第17页 |
| 1.5.3 引物设计原则 | 第17-18页 |
| 1.6 质粒标准品的制备和标准曲线的绘制 | 第18页 |
| 1.7 实验思路 | 第18-20页 |
| 第2章 双重荧光定量PCR鉴别阪崎克罗诺杆菌和丙二酸盐阳性克罗诺杆菌 | 第20-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验所需仪器 | 第20页 |
| 2.1.2 实验所需试剂及耗材 | 第20-21页 |
| 2.1.3 实验所用菌株 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-28页 |
| 2.2.1 引物和探针的设计 | 第22-24页 |
| 2.2.2 引物和探针稀释 | 第24页 |
| 2.2.3 培养基的配制 | 第24-25页 |
| 2.2.4 细菌基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.5 fusA基因鉴定菌种 | 第26页 |
| 2.2.6 探针特异性检测 | 第26页 |
| 2.2.7 探针灵敏性检测 | 第26-28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-33页 |
| 2.3.1 fusA基因分种结果 | 第28页 |
| 2.3.2 探针特异性检测结果 | 第28-29页 |
| 2.3.3 探针灵敏性检测结果 | 第29-33页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第33-35页 |
| 第3章 质粒标准品的制备和标准曲线的绘制 | 第35-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-38页 |
| 3.1.1 实验所需仪器 | 第35页 |
| 3.1.2 实验试剂及耗材 | 第35-36页 |
| 3.1.3 实验所用菌株 | 第36页 |
| 3.1.4 JM109感受态细胞 | 第36-37页 |
| 3.1.5 pMD-18T载体 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-43页 |
| 3.2.1 培养基的配制 | 第38-39页 |
| 3.2.2 质粒标准品的制备和标准曲线的绘制 | 第39-41页 |
| 3.2.3 胶回收方法（QIA quick胶回收试剂盒） | 第41-42页 |
| 3.2.4 质粒提取方法（Promega质粒提取试剂盒） | 第42-43页 |
| 3.3 实验结果 | 第43-46页 |
| 3.3.1 阪崎克罗诺杆菌CSM-CTD探针可检测的拷贝数 | 第43-44页 |
| 3.3.2 丙二酸盐阳性克罗诺杆菌CSM-CTD探针可检测的拷贝数 | 第44-45页 |
| 3.3.3 阪崎克罗诺杆菌ATCC29544 CS-CMA探针可检测的拷贝数 | 第45-46页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 作者简介 | 第51-52页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
