| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩写对照表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 微藻研究现状 | 第13页 |
| 1.2 小球藻转基因的研究 | 第13-14页 |
| 1.3 乳铁蛋白的研究 | 第14-16页 |
| 1.3.1 乳铁蛋白的介绍 | 第14-15页 |
| 1.3.2 乳铁蛋白的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4 微藻电转化的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.5 微藻生长环境因素的研究进展 | 第17-21页 |
| 1.5.1 温度 | 第18页 |
| 1.5.2 光 | 第18-19页 |
| 1.5.3 pH值 | 第19页 |
| 1.5.4 盐度(NaCl) | 第19-20页 |
| 1.5.5 营养因子 | 第20-21页 |
| 1.6 研究目的和意义及主要内容 | 第21-22页 |
| 1.7 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 沙漠小球藻转人乳铁蛋白的电转优化研究 | 第23-36页 |
| 2.1 试验材料和仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.2 仪器设备和主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.2.1 仪器设备 | 第24页 |
| 2.1.2.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 常用培养基配方 | 第24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-26页 |
| 2.2.1 质粒载体pCAMBIA2300-35S-GFP-HLF-OCS验证 | 第24-25页 |
| 2.2.2 生长曲线的测定 | 第25页 |
| 2.2.3 电转化过程 | 第25页 |
| 2.2.4 单因素试验设计 | 第25-26页 |
| 2.2.5 正交试验设计 | 第26页 |
| 2.2.6 分析方法 | 第26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-34页 |
| 2.3.1 质粒载体pCAMBIA2300-35S-GFP-HLF-OCS鉴定及其荧光表达 | 第26-27页 |
| 2.3.2 小球藻细胞生长曲线的测定 | 第27-28页 |
| 2.3.3 单因素试验结果 | 第28-33页 |
| 2.3.3.1 优化电转击穿电压 | 第28页 |
| 2.3.3.2 优化培养周期 | 第28-29页 |
| 2.3.3.3 优化渗透剂浓度 | 第29-30页 |
| 2.3.3.4 优化渗透时间 | 第30-31页 |
| 2.3.3.5 优化电击缓冲液浓度 | 第31-32页 |
| 2.3.3.6 优化质粒浓度 | 第32-33页 |
| 2.3.4 正交试验确定最优电转体系 | 第33页 |
| 2.3.5 采用PCR手段对遗传稳定性进行评价 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 人乳铁蛋白的沙漠小球藻表达系统的构建与鉴定 | 第36-45页 |
| 3.1 材料与方法 | 第36-40页 |
| 3.1.1 材料 | 第36-37页 |
| 3.1.2 方法 | 第37-40页 |
| 3.1.2.1 藻种培养及其条件 | 第37页 |
| 3.1.2.2 提取人全血RNA和克隆人乳铁蛋白基因 | 第37-38页 |
| 3.1.2.3 构建重组植物表达载体p CAMBIA2300-35S-HLF-OCS | 第38页 |
| 3.1.2.4 电击转化 | 第38-39页 |
| 3.1.2.5 DNA和总RNA的提取及分析 | 第39页 |
| 3.1.2.6 SDS-PAGE和Western Blot分析 | 第39-40页 |
| 3.2 结果与分析 | 第40-43页 |
| 3.2.1 人全血RNA提取和人乳铁蛋白基因的克隆 | 第40页 |
| 3.2.2 植物表达载体pCAMBIA2300-35S-HLF-OCS构建和验证 | 第40-41页 |
| 3.2.3 电转化单克隆检测 | 第41-42页 |
| 3.2.4 DNA和RNA分析 | 第42-43页 |
| 3.2.5 SDS-PAGE和Western Blot分析 | 第43页 |
| 3.3 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 不同培养条件对沙漠小球藻产人乳铁蛋白的影响 | 第45-59页 |
| 4.1 材料与方法 | 第45-47页 |
| 4.1.1 材料与仪器 | 第45页 |
| 4.1.2 试验方法 | 第45-47页 |
| 4.1.2.1 培养周期的优化 | 第45-46页 |
| 4.1.2.2 单因素试验设定 | 第46页 |
| 4.1.2.3 Plackett-Burman (PB)试验 | 第46-47页 |
| 4.1.2.4 响应曲面优化(Central Composite Design(CCD)) | 第47页 |
| 4.2 结果与分析 | 第47-58页 |
| 4.2.1 单因素试验结果与分析 | 第47-53页 |
| 4.2.1.1 培养周期优化 | 第47-48页 |
| 4.2.1.2 初始pH值优化 | 第48页 |
| 4.2.1.3 碳源(NaCO_3)优化 | 第48-49页 |
| 4.2.1.4 氮源(NaNO_3)优化 | 第49页 |
| 4.2.1.5 磷源(K_2HPO_4)优化 | 第49-50页 |
| 4.2.1.6 NaCl优化 | 第50页 |
| 4.2.1.7 MgSO_4优化 | 第50-51页 |
| 4.2.1.8 FeSO_4优化 | 第51-52页 |
| 4.2.1.9 ZnSO_4优化 | 第52页 |
| 4.2.1.10 CuSO_4优化 | 第52-53页 |
| 4.2.1.11 H_3BO_3优化 | 第53页 |
| 4.2.2 Plackett- Burman (PB)试验结果与分析 | 第53-54页 |
| 4.2.3 Central Composite Design(CCD)试验结果与分析 | 第54-58页 |
| 4.3 讨论 | 第58-59页 |
| 第五章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 5.1 结论 | 第59页 |
| 5.2 特色与创新之处 | 第59-60页 |
| 5.3 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68-69页 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 | 第69-70页 |
| 附表1 正交试验结果统计表 | 第70页 |
