| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 第一部分 前言 | 第12-27页 |
| 1 治疗性单克隆抗体药物 | 第12-13页 |
| 2 单克隆抗体的发展过程 | 第13页 |
| 3 采用噬菌体展示技术筛选抗体 | 第13-14页 |
| 4 抗体片段和单域抗体 | 第14-15页 |
| 5 乳腺癌的标志物 | 第15-17页 |
| 6 HER2 | 第17-22页 |
| 6.1 HER2的简介 | 第17-19页 |
| 6.2 HER2的靶点表位 | 第19-20页 |
| 6.3 抗HER2的单克隆抗体 | 第20-22页 |
| 7 FGFR2 | 第22-27页 |
| 7.1 FGFR2的简介 | 第22-24页 |
| 7.2 FGFR2的靶点表位 | 第24-25页 |
| 7.3 抗FGFR2的单克隆抗体 | 第25-27页 |
| 第二部分 抗HER2的人源单域抗体的筛选及鉴定研究 | 第27-60页 |
| 1 材料和方法 | 第27-43页 |
| 1.1 实验仪器和试剂配方 | 第27-29页 |
| 1.2 材料和试剂的清洁及灭菌 | 第29-30页 |
| 1.3 超净工作台的清洁及灭菌 | 第30页 |
| 1.4 KM13辅助噬菌体的制备 | 第30-31页 |
| 1.5 KM13辅助噬菌体的滴度测定及检测 | 第31页 |
| 1.6 单域抗体库的扩增 | 第31-32页 |
| 1.7 单域抗体次级库的制备 | 第32页 |
| 1.8 抗原HER2-domain II的制备 | 第32-35页 |
| 1.8.1 HER2-domain II蛋白的表达 | 第32-33页 |
| 1.8.2 HER2-domain II蛋白的纯化 | 第33页 |
| 1.8.3 HER2-domain II蛋白的复性 | 第33-34页 |
| 1.8.4 HER2-domain II的SDS-PAGE凝胶电泳 | 第34-35页 |
| 1.9 携带单域抗体的噬菌体的筛选 | 第35-38页 |
| 1.9.1 单域抗体噬菌体文库的第一轮筛选 | 第35页 |
| 1.9.2 单域抗体噬菌体文库的进一轮筛选 | 第35-36页 |
| 1.9.3 采用多克隆噬菌体ELISA筛选单域抗体 | 第36页 |
| 1.9.4 单域抗体的制备 | 第36-37页 |
| 1.9.5 单克隆噬菌体ELISA筛选 | 第37页 |
| 1.9.6 单域抗体的DNA序列分析 | 第37-38页 |
| 1.10 位点定向诱变PCR | 第38-39页 |
| 1.11 将单域抗体DNA序列连接到表达载体上 | 第39-41页 |
| 1.12 单域抗体aHER2-1C1和aHER2-2B4的表达纯化 | 第41-42页 |
| 1.12.1 aHER2-1C1和aHER2-2B4的表达 | 第41-42页 |
| 1.12.2 aHER2-1C1和aHER2-2B4的纯化 | 第42页 |
| 1.12.3 单域抗体的SDS-PAGE | 第42页 |
| 1.13 采用ELISA鉴定单域抗体aHER2-1C1和aHER2-2B4的结合能力 | 第42页 |
| 1.14 非竞争性ELISA检测aHER2-1C1的亲和力 | 第42-43页 |
| 2 结果 | 第43-53页 |
| 2.1 KM13辅助噬菌体的制备 | 第43-44页 |
| 2.2 检测KM13辅助噬菌体的胰蛋白酶酶切位点 | 第44-45页 |
| 2.3 单域抗体库的扩增 | 第45页 |
| 2.4 抗原HER2-domain II蛋白的纯化 | 第45-47页 |
| 2.4.1 HER2-domain II的DNA和蛋白质序列 | 第45页 |
| 2.4.2 HER2-domain II蛋白的纯化结果 | 第45-46页 |
| 2.4.3 纯化的HER2-domain II的还原性与非还原性SDS-PAGE | 第46-47页 |
| 2.4.4 纯化的HER2-domain II的产量 | 第47页 |
| 2.5 噬菌体抗体筛选的滴度检测 | 第47页 |
| 2.6 多克隆噬菌体ELISA | 第47-48页 |
| 2.7 采用单克隆噬菌体ELISA初步筛选抗HER2-domain II的单域抗体 | 第48-49页 |
| 2.8 采用多个无关抗原和噬菌体ELISA鉴定抗HER2-domain II的单域抗体 | 第49-50页 |
| 2.9 抗HER2-domain II的单域抗体的DNA测序 | 第50页 |
| 2.10 2 个单域抗体的位点定向诱变 | 第50页 |
| 2.11 将2个单域抗体的DNA序列连接到表达载体内 | 第50-51页 |
| 2.12 单域抗体aHER2-1C1和aHER2-2B4的表达纯化 | 第51-52页 |
| 2.13 ELISA验证aHER2-1C1和aHER2-2B4的结合能力 | 第52-53页 |
| 2.14 采用非竞争性ELISA检测aHER2-1C1的亲和力 | 第53页 |
| 3 讨论 | 第53-60页 |
| 3.1 单域抗体库的准备 | 第53-56页 |
| 3.2 HER2-domain II蛋白的纯化 | 第56-58页 |
| 3.3 抗HER2-domain II的单域抗体 | 第58-60页 |
| 第三部分 抗FGFR2的人源单域抗体的筛选及鉴定研究 | 第60-76页 |
| 1 材料和方法 | 第60-67页 |
| 1.1 实验仪器和试剂配方 | 第60-63页 |
| 1.2 KM13辅助噬菌体的制备 | 第63-64页 |
| 1.3 单域抗体库的准备 | 第64页 |
| 1.4 抗原FGFR2蛋白片段的制备 | 第64页 |
| 1.5 携带单域抗体的噬菌体的筛选 | 第64-67页 |
| 1.5.1 单域抗体噬菌体文库的第一轮筛选 | 第64-65页 |
| 1.5.2 单域抗体噬菌体文库的进一轮筛选 | 第65页 |
| 1.5.3 采用多克隆噬菌体ELISA筛选单域抗体 | 第65-66页 |
| 1.5.4 单域抗体的制备 | 第66页 |
| 1.5.5 单克隆噬菌体ELISA筛选 | 第66-67页 |
| 1.5.6 单域抗体的DNA序列分析 | 第67页 |
| 2 结果 | 第67-72页 |
| 2.1 单域抗体库的扩增 | 第67页 |
| 2.2 抗原FGFR2蛋白片段的合成 | 第67-69页 |
| 2.2.1 合成信息 | 第67-68页 |
| 2.2.2 高效液相色谱结果 | 第68页 |
| 2.2.3 质谱结果 | 第68-69页 |
| 2.3 噬菌体抗体筛选的滴度检测 | 第69-70页 |
| 2.4 多克隆噬菌体ELISA | 第70页 |
| 2.5 采用单克隆噬菌体ELISA初步筛选抗FGFR2蛋白片段单域抗体 | 第70-71页 |
| 2.6 采用多个无关抗原和噬菌体ELISA鉴定抗FGFR2蛋白片段的单域抗体 | 第71-72页 |
| 2.7 抗FGFR2蛋白片段的单域抗体的DNA测序 | 第72页 |
| 3 讨论 | 第72-76页 |
| 3.1 单域抗体库的相关研究 | 第72-73页 |
| 3.2 FGFR2蛋白片段的合成 | 第73-74页 |
| 3.3 筛选抗FGFR2蛋白片段的单域抗体 | 第74-76页 |
| 结论与展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-90页 |
| 在学期间发表论文 | 第90-91页 |
| 附录 英文缩略词表 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
