| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第9-21页 |
| 1.1 蛋白质酰基化的研究简介 | 第9-10页 |
| 1.2 蛋白质的酶催化和非酶催化酰基化 | 第10-16页 |
| 1.2.1 酶催化乙酰化和丙酰化反应机制 | 第12-13页 |
| 1.2.2 非酶催化乙酰化和丙酰化反应机制 | 第13-16页 |
| 1.3 蛋白质酰基化对短链脂肪酸代谢的影响 | 第16-19页 |
| 1.3.1 短链脂肪酸代谢 | 第16-18页 |
| 1.3.2 酰基化修饰对短链脂肪酸代谢的影响 | 第18-19页 |
| 1.4 本论文的研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 第2章 乙酸代谢及两种酰基化(非酶催化和酶催化)修饰的比较研究 | 第21-49页 |
| 2.1 引言 | 第21-22页 |
| 2.2 实验原理 | 第22页 |
| 2.3 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.3.1 实验质粒和菌种 | 第22-23页 |
| 2.3.2 试剂、仪器与培养基的配置方法 | 第23-25页 |
| 2.3.3 培养基和缓冲液配制 | 第25-26页 |
| 2.4 实验方法 | 第26-32页 |
| 2.4.1 基因的克隆和表达 | 第26-29页 |
| 2.4.2 目的蛋白的表达与纯化 | 第29页 |
| 2.4.3 体外酰基化反应 | 第29-30页 |
| 2.4.4 酰基CoA合成酶的酶活测定 | 第30页 |
| 2.4.5 Western Blot | 第30-31页 |
| 2.4.6 无标记定量质谱分析体外酰基化肽段 | 第31页 |
| 2.4.7 定点突变实验 | 第31-32页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第32-47页 |
| 2.5.1 体外BsAcsA的酰基化简介 | 第32-33页 |
| 2.5.2 BsAcsA和BsAcuA蛋白的表达和纯化 | 第33页 |
| 2.5.3 BsAcsA的酶催化和非酶催化乙酰化 | 第33-36页 |
| 2.5.4 酶催化和非酶催化乙酰化修饰的比较研究 | 第36-42页 |
| 2.5.5 BsAcsA的酶催化和非酶催化丙酰化 | 第42-44页 |
| 2.5.6 酶催化和非酶催化丙酰化修饰的比较研究 | 第44-45页 |
| 2.5.7 酰基化位点K549对AcsA的影响 | 第45-47页 |
| 2.6 本章小结 | 第47-49页 |
| 第3章 糖多孢红霉菌丙酰COA合成酶酰基化对红霉素产量的影响 | 第49-66页 |
| 3.1 引言 | 第49页 |
| 3.2 实验原理 | 第49-50页 |
| 3.3 实验材料 | 第50-53页 |
| 3.3.1 实验质粒和菌种 | 第50页 |
| 3.3.2 试剂、仪器与培养基的配制方法 | 第50-52页 |
| 3.3.3 培养基和缓冲溶液配制 | 第52-53页 |
| 3.4 实验方法 | 第53-57页 |
| 3.4.1 RNA的提取和RT-PCR | 第53-54页 |
| 3.4.2 目的蛋白的表达和纯化 | 第54-55页 |
| 3.4.3 S.erythraea SACE_1780-过表达突变体的构建 | 第55-56页 |
| 3.4.4 丙酰CoA合成酶活性的测定 | 第56页 |
| 3.4.5 体外丙酰化反应 | 第56页 |
| 3.4.6 蛋白质的免疫印迹实验 | 第56页 |
| 3.4.7 红霉素的测定实验 | 第56页 |
| 3.4.8 胞内Pr-CoA含量的测定 | 第56-57页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第57-65页 |
| 3.5.1 丙酸代谢途径中丙酰CoA合成酶PrpE和丙酸激酶的转录水平 | 第57-59页 |
| 3.5.2 PrpE酶活性的研究 | 第59-60页 |
| 3.5.3 PrpE的酶催化和非酶催化丙酰化 | 第60-63页 |
| 3.5.4 S.erythraea SACE_1780-过表达突变体提高了红霉素的产量 | 第63-65页 |
| 3.6 本章小结 | 第65-66页 |
| 第4章 总结与展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
