| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| ·珠三角地区对虾养殖业的微生态制剂应用现况及面临的问题 | 第12-14页 |
| ·珠三角地区对虾养殖业的微生态制剂应用现况 | 第12-13页 |
| ·珠三角地区对虾养殖业的微生态制剂应用面临的问题 | 第13-14页 |
| ·宏基因组文库技术 | 第14-18页 |
| ·未培养微生物 | 第14页 |
| ·宏基因组技术起源 | 第14-15页 |
| ·宏基因文库分类 | 第15页 |
| ·构建宏基因组文库的策略 | 第15页 |
| ·宏基因组DNA 的提取与纯化 | 第15-17页 |
| ·宏基因组文库的筛选 | 第17-18页 |
| ·水体宏基因组学的研究现状 | 第18-20页 |
| ·水体的微生态监测 | 第18-19页 |
| ·新型基因、代谢途径的发现 | 第19页 |
| ·污染治理 | 第19-20页 |
| ·几丁质以及几丁质酶 | 第20-23页 |
| ·几丁质 | 第20-21页 |
| ·几丁质酶 | 第21-23页 |
| ·本研究的目的及内容 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的 | 第23页 |
| ·本研究的内容 | 第23-24页 |
| 第二章 养殖水体几丁质降解菌群的DGGE 分析 | 第24-36页 |
| 引言 | 第24页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·试验材料 | 第24页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第24-25页 |
| ·基本溶液的配置 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-29页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·NaAC 无水乙醇沉淀DNA | 第27页 |
| ·几丁质酶基因PCR 的扩增 | 第27-28页 |
| ·几丁质降解菌的DGGE 分离 | 第28页 |
| ·几丁质降解菌群群落多样性统计学分析 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-35页 |
| ·养殖水体总DNA 的提取 | 第29页 |
| ·几丁质酶基因的PCR 优化 | 第29-32页 |
| ·DGGE 指纹图谱的分析 | 第32-33页 |
| ·不同养殖时期水样几丁质降解菌群的遗传多样性 | 第33页 |
| ·不同养殖时期水样几丁质降解菌群的群落相似性 | 第33-35页 |
| ·本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 养殖水体几丁质酶基因文库的构建 | 第36-47页 |
| 引言 | 第36页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·试验材料 | 第36页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第36-37页 |
| ·相关溶液的配制 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·养殖水样品基因组DNA 的提取 | 第37页 |
| ·几丁质酶基因片段的扩增 | 第37-38页 |
| ·几丁质酶基因文库的构建 | 第38-39页 |
| ·重组子筛选与鉴定 | 第39-40页 |
| ·几丁质酶基因序列分析 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-46页 |
| ·阳性质粒检测鉴定 | 第40-41页 |
| ·质粒酶切图谱 | 第41-42页 |
| ·测序结果分析 | 第42-46页 |
| ·本章小结 | 第46-47页 |
| 第四章 典型养殖水体宏基因组技术平台的建立 | 第47-60页 |
| 引言 | 第47页 |
| ·材料 | 第47-51页 |
| ·样品的采集与预处理 | 第47页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第47-48页 |
| ·培养基及抗生素的配制 | 第48-49页 |
| ·常规溶液，缓冲液的配制 | 第49页 |
| ·载体与宿主菌的的保存 | 第49-51页 |
| ·实验方法 | 第51-54页 |
| ·宏基因组DNA 的提取 | 第51页 |
| ·宏基因组DNA 的回收与浓缩 | 第51-52页 |
| ·插入DNA 片断末端补平(end-repair reaction) | 第52页 |
| ·宏基因组DNA 的连接转化 | 第52-53页 |
| ·CopycontrolTM Fosmid 克隆的包装 | 第53-54页 |
| ·CopycontrolTM Fosmid 文库的涂布 | 第54页 |
| ·CopycontrolTM Fosmid 文库的保存 | 第54页 |
| ·Fosmid 文库质量的鉴定 | 第54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-59页 |
| ·养殖水体微生物菌体收集 | 第55页 |
| ·宏基因组DNA 的提取结果 | 第55页 |
| ·养殖水样中大片段目的DNA 的分离筛选 | 第55-56页 |
| ·养殖水样中大片段目的DNA 的回收 | 第56-57页 |
| ·养殖水样中大片段目的插入DNA 末端补平和浓度控制 | 第57页 |
| ·Fosmid 文库的构建及评估 | 第57-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第五章 Fosmid 文库中几丁质酶基因的筛选与分析 | 第60-69页 |
| 引言 | 第60页 |
| ·材料 | 第60-61页 |
| ·样品来源 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60-61页 |
| ·方法 | 第61-63页 |
| ·几丁质酶的筛选方法 | 第61页 |
| ·Fosmid 阳性克隆的培养、验证和测序 | 第61-62页 |
| ·几丁质酶基因的序列分析 | 第62页 |
| ·几丁质酶活性的测定 | 第62-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-68页 |
| ·文库的几丁质酶活力分析 | 第63页 |
| ·阳性克隆子的验证 | 第63-64页 |
| ·几丁质酶基因序列分析 | 第64-66页 |
| ·克隆CF2 酶学活性的初步研究 | 第66-68页 |
| ·本章小结 | 第68-69页 |
| 结论与展望 | 第69-71页 |
| 创新点 | 第69页 |
| 主要结论 | 第69-70页 |
| 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 附件 | 第80页 |
