| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 MiR-375与多能性干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞关系的研究进展 | 第11-22页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 1 MiR-375的发生与表达调控 | 第12-15页 |
| 1.1 MiR-375的发生与作用机制 | 第12-14页 |
| 1.2 MiR-375的表达调控 | 第14-15页 |
| 2 MiR-375在胰岛β细胞发育过程中的作用 | 第15-16页 |
| 3 MiR-375在胰岛素分泌过程中的作用 | 第16-18页 |
| 4 MiR-375在多能性干细胞分化为IPCs中的作用 | 第18-21页 |
| 4.1 MiR-375与ESCs胰向分化 | 第18-19页 |
| 4.2 MiR-375与iPSCs胰向分化 | 第19-20页 |
| 4.3 MiR-375与MSCs胰向分化 | 第20-21页 |
| 5 展望 | 第21-22页 |
| 第二章 实验研究 人胚胎干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞分化方案的优化及过表达miR-375对人胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞的影响 | 第22-62页 |
| 前言 | 第22-24页 |
| 1 试剂和设备 | 第24-26页 |
| 1.1 试剂和材料 | 第24页 |
| 1.2 仪器和设备 | 第24-26页 |
| 2 方法 | 第26-37页 |
| 2.1 hESCs定向分化为IPCs分化方案的优化 | 第26-31页 |
| 2.1.1 hESCs的维持培养 | 第26-27页 |
| 2.1.2 以RA为变量的hESCs向IPCs分化培养方案 | 第27-28页 |
| 2.1.3 分化各阶段细胞的鉴定 | 第28-31页 |
| 2.2 过表达miR-375对hESCs分化为IPCs的影响 | 第31-37页 |
| 2.2.1 过表达miR-375慢病毒载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.2 过表达miR-375慢病毒包装与质量检测 | 第32-33页 |
| 2.2.3 稳定过表达miR-375 hESCs的建立 | 第33-34页 |
| 2.2.4 稳定过表达miR-375 hESCs胰向分化 | 第34页 |
| 2.2.5 脂质体介导的miR-375 mimic瞬时转染胰向分化各阶段的hESCs | 第34-35页 |
| 2.2.6 实时定量PCR检测分化效率 | 第35页 |
| 2.2.7 胰岛素免疫荧光染色 | 第35-36页 |
| 2.2.8 Elisa检测分化末期细胞胰岛素分泌效率 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-58页 |
| 3.1 hESCs定向分化为IPCs分化方案的优化 | 第37-42页 |
| 3.1.1 hESCs维持培养状态 | 第37-38页 |
| 3.1.2 hESCs向IPCs分化过程中各阶段的形态 | 第38-40页 |
| 3.1.3 RA对hESCs定向分化为IPCs的影响 | 第40-42页 |
| 3.1.4 RA对hESCs分化过程中miR-375表达水平的影响 | 第42页 |
| 3.2 过表达miR-375对hESCs分化为IPCs的影响 | 第42-58页 |
| 3.2.1 过表达miR-375慢病毒载体的构建及病毒感染效率鉴定 | 第42-45页 |
| 3.2.2 稳定过表达miR-375 hESCs的建立 | 第45-49页 |
| 3.2.3 稳定过表达miR-375对hESCs向IPCs分化的影响 | 第49-53页 |
| 3.2.4 瞬时过表达miR-375对hESCs向IPCs分化的影响 | 第53-56页 |
| 3.2.5 胰岛素免疫荧光染色鉴定 | 第56-57页 |
| 3.2.6 胰岛素分泌效率检测 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 4.1 hESCs定向分化为IPCs分化方案的优化 | 第58-59页 |
| 4.2 过表达miR-375对hESCs分化为IPCs的影响 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间论文发表情况 | 第70页 |
