| 附件 | 第3-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略词 | 第14-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-31页 |
| 1.1 水稻条纹叶枯病 | 第16-18页 |
| 1.1.1 水稻条纹叶枯病症状、分布与危害 | 第16-17页 |
| 1.1.2 水稻条纹病毒 | 第17-18页 |
| 1.2 水稻黑条矮缩病 | 第18-19页 |
| 1.2.1 水稻黑条矮缩病症状、分布与危害 | 第18-19页 |
| 1.2.2 水稻黑条矮缩病毒 | 第19页 |
| 1.3 植物病毒的致病机理 | 第19-20页 |
| 1.4 蛋白质组学分析技术 | 第20-23页 |
| 1.4.1 双向电泳 | 第21页 |
| 1.4.2 质谱 | 第21-22页 |
| 1.4.3 iTRAQ | 第22-23页 |
| 1.5 RNAi | 第23-27页 |
| 1.5.1 RNAi概述 | 第23-24页 |
| 1.5.2 RNA沉默主要蛋白因子 | 第24页 |
| 1.5.3 DCL | 第24-25页 |
| 1.5.4 RDR | 第25页 |
| 1.5.5 AGO | 第25-27页 |
| 1.5.6 RNA沉默抑制机制 | 第27页 |
| 1.6 水稻抗病性 | 第27-29页 |
| 1.6.1 病原介导的抗病策略 | 第27-29页 |
| 1.6.2 病原介导抗病性的扩散 | 第29页 |
| 1.7 转基因植物的标记基因 | 第29-30页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 第二章 利用i TRAQ技术解析水稻条纹叶枯病症状形成机理 | 第31-65页 |
| 2.1 材料与方法 | 第32-41页 |
| 2.1.1 材料 | 第32页 |
| 2.1.2 斑点杂交 | 第32页 |
| 2.1.3 RSV侵染 | 第32页 |
| 2.1.4 提取RNA | 第32-33页 |
| 2.1.5 RT-PCR | 第33-34页 |
| 2.1.6 反转录c DNA | 第34页 |
| 2.1.7 RT-q PCR(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction) | 第34-35页 |
| 2.1.8 蛋白质提取 | 第35-36页 |
| 2.1.9 蛋白质酶解 | 第36页 |
| 2.1.10 iTRAQ标记 | 第36-37页 |
| 2.1.11 酶解肽段预分离及LC-MS/MS质谱分析 | 第37-39页 |
| 2.1.12 质谱数据分析 | 第39页 |
| 2.1.13 Gene Ontology及KEGG注释 | 第39页 |
| 2.1.14 差异表达蛋白质间互作分析 | 第39-40页 |
| 2.1.15 Northern印迹分析 | 第40-41页 |
| 2.2 结果与分析 | 第41-62页 |
| 2.2.1 灰飞虱带毒率 | 第41-42页 |
| 2.2.2 症状观察 | 第42页 |
| 2.2.3 RT-PCR检测 | 第42-43页 |
| 2.2.4 蛋白质鉴定及蛋白质定量 | 第43页 |
| 2.2.5 下调蛋白质GO注释 | 第43-45页 |
| 2.2.6 上调蛋白质GO注释 | 第45-47页 |
| 2.2.7 KEGG | 第47-49页 |
| 2.2.8 差异表达蛋白质 | 第49-60页 |
| 2.2.9 症状相关基因表达 | 第60-62页 |
| 2.3 讨论 | 第62-65页 |
| 第三章 RSV SP蛋白与水稻蛋白质RAP互作研究 | 第65-73页 |
| 3.1 材料与方法 | 第65-69页 |
| 3.1.1 材料 | 第65页 |
| 3.1.2 构建载体 | 第65-68页 |
| 3.1.3 酵母双杂交 | 第68-69页 |
| 3.1.4 β-半乳糖苷酶的活性检测 | 第69页 |
| 3.2 结果与分析 | 第69-71页 |
| 3.2.1 水稻基因克隆 | 第69页 |
| 3.2.2 猎物载体构建 | 第69-70页 |
| 3.2.3 病毒蛋白质pc3与水稻蛋白质互作 | 第70-71页 |
| 3.2.4 病毒蛋白质SP与水稻蛋白质互作 | 第71页 |
| 3.3 讨论 | 第71-73页 |
| 第四章 RNAi介导的水稻抗RSV机制研究 | 第73-88页 |
| 4.1 材料与方法 | 第73-79页 |
| 4.1.1 材料 | 第73页 |
| 4.1.2 构建体外转录载体 | 第73-75页 |
| 4.1.3 sRNA印迹分析 | 第75-77页 |
| 4.1.4 反转录c DNA | 第77页 |
| 4.1.5 RT-qPCR | 第77-79页 |
| 4.2 结果与分析 | 第79-86页 |
| 4.2.1 构建克隆载体 | 第79-80页 |
| 4.2.2 构建表达载体 | 第80页 |
| 4.2.3 克隆载体和表达载体序列比对 | 第80-81页 |
| 4.2.4 接种RSV前后转基因水稻si RNAs积累量 | 第81-82页 |
| 4.2.5 内参基因引物特异性分析 | 第82页 |
| 4.2.6 转基因水稻中AGOs表达量 | 第82-84页 |
| 4.2.7 转基因水稻中RDRs表达量 | 第84-85页 |
| 4.2.8 转基因水稻中DCLs表达量 | 第85-86页 |
| 4.3 讨论 | 第86-88页 |
| 第五章 抗RSV和RBSDV的转基因水稻 | 第88-104页 |
| 5.1 材料与方法 | 第88-94页 |
| 5.1.1 材料 | 第88页 |
| 5.1.2 提取水稻基因组 | 第88-89页 |
| 5.1.3 转基因水稻基因组PCR检测 | 第89-90页 |
| 5.1.4 Southern印迹分析 | 第90-92页 |
| 5.1.5 构建体外转录载体 | 第92-93页 |
| 5.1.6 s RNA印迹分析 | 第93页 |
| 5.1.7 抗病性鉴定 | 第93-94页 |
| 5.2 结果与分析 | 第94-102页 |
| 5.2.1 种植地灰飞虱虫量及带毒率调查 | 第94页 |
| 5.2.2 T2代转基因水稻 | 第94-96页 |
| 5.2.3 T3代转基因水稻 | 第96-97页 |
| 5.2.4 T4代转基因水稻 | 第97-98页 |
| 5.2.5 正义链和负义链检测 | 第98-99页 |
| 5.2.6 拷贝数鉴定 | 第99-100页 |
| 5.2.7 构建载体p MD18-DB | 第100页 |
| 5.2.8 构建表达载体p SPT18-DB | 第100-101页 |
| 5.2.9 克隆载体和表达载体序列比对 | 第101-102页 |
| 5.2.10 转基因水稻的si RNAs积累量 | 第102页 |
| 5.3 讨论 | 第102-104页 |
| 第六章 结论 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-117页 |
| 附录 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 作者简历 | 第119页 |
