| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 1. 引言和文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 STAT1基因与骨骼发育 | 第11-17页 |
| 1.1.1 STAT1基因与人类骨质疏松相关 | 第11-12页 |
| 1.1.2 stat1基因调控小鼠骨骼发育 | 第12-13页 |
| 1.1.3 STAT1基因与斑马鱼骨骼发育 | 第13-17页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9基因打靶技术概述 | 第17-18页 |
| 1.3 研究意义 | 第18-20页 |
| 2. 材料和方法 | 第20-33页 |
| 2.1 材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.2 主要溶液 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要实验耗材和仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-33页 |
| 2.2.1 斑马鱼的饲养 | 第22页 |
| 2.2.2 CRISPR/Cas9基因敲除靶位点设计 | 第22页 |
| 2.2.3 构建g RNA表达载体以及g RNA体外合成 | 第22-26页 |
| 2.2.4 Cas9核酸酶表达载体结构以及Cas9 m RNA的合成 | 第26-27页 |
| 2.2.5 斑马鱼胚胎的显微注射 | 第27-28页 |
| 2.2.6 T7E1法和Sanger测序检测靶位点的有效性 | 第28-29页 |
| 2.2.7 斑马鱼突变体的筛选 | 第29-32页 |
| 2.2.8 磷酸氟达拉滨处理斑马鱼胚胎 | 第32-33页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第33-46页 |
| 3.1 CRISPR/Cas9打靶技术敲除斑马鱼stat1a基因 | 第33-44页 |
| 3.1.1 体外合成特异性g RNA和Cas9 m RNA | 第33-35页 |
| 3.1.2 CRISPR/Cas9敲除方法的体内活性检测 | 第35-36页 |
| 3.1.3 斑马鱼F0代突变体的筛选 | 第36-38页 |
| 3.1.4 斑马鱼F1代突变遗传性的检测 | 第38页 |
| 3.1.5 斑马鱼F1代的生长速度检测 | 第38-40页 |
| 3.1.6 17号斑马鱼F1代突变体的筛选 | 第40-42页 |
| 3.1.7 15号斑马鱼F1代突变体的筛选结果 | 第42-43页 |
| 3.1.8 17号斑马鱼F2代突变体的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2 磷酸氟达拉滨处理斑马鱼胚胎 | 第44-46页 |
| 3.2.1 斑马鱼胚胎的死亡率 | 第44页 |
| 3.2.2 斑马鱼胚胎的表型变化 | 第44-46页 |
| 4. 讨论 | 第46-49页 |
| 5. 研究小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录 1 | 第54-55页 |
| 附录 2 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
