| 摘要 | 第3-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 符号说明 | 第14-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-28页 |
| 1.1 Lrp转录调控家族的研究进展 | 第17-24页 |
| 1.1.1 Lrp家族蛋白的结构特征 | 第17-18页 |
| 1.1.2 Lrp家族蛋白的调控机制 | 第18-20页 |
| 1.1.3 Lrp家族蛋白的调控功能 | 第20-23页 |
| 1.1.4 放线菌中Lrp家族蛋白的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.2 红霉素生物合成的分子调控的研究进展 | 第24-26页 |
| 1.2.1 红霉素的生物合成 | 第24-25页 |
| 1.2.2 红霉素生物合成的分子调控 | 第25-26页 |
| 1.3 本研究的选题意义和主要内容 | 第26-28页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第28-51页 |
| 2.1 研究中所用菌株 | 第28-29页 |
| 2.2 研究中所用质粒 | 第29-31页 |
| 2.3 研究中所用引物 | 第31-33页 |
| 2.4 培养基和试剂 | 第33-38页 |
| 2.5 细菌的培养和保存 | 第38-39页 |
| 2.6 大肠杆菌和DNA操作的通用实验方法 | 第39-41页 |
| 2.7 糖多孢红霉菌和天蓝色链霉菌基因组DNA的提取 | 第41页 |
| 2.8 糖多孢红霉菌原生质体的制备和转化 | 第41-42页 |
| 2.9 两亲本介导的质粒DNA的跨属接合转移 | 第42页 |
| 2.10 糖多孢红霉菌和天蓝色链霉菌的发酵培养 | 第42页 |
| 2.11 HPLC法测定红霉素A标准曲线 | 第42-43页 |
| 2.12 糖多孢红霉菌和天蓝色链霉菌中抗生素的提取及检测 | 第43-44页 |
| 2.13 qRT-PCR检测基因转录水平 | 第44-45页 |
| 2.14 蛋白的表达、纯化和SDS-PAGE分析 | 第45-48页 |
| 2.15 EMSA分析 | 第48页 |
| 2.16 DNase I footprinting分析 | 第48-49页 |
| 2.17 胞内外游离氨基酸的含量测定 | 第49页 |
| 2.18 大肠杆菌相对荧光强度的检测 | 第49-50页 |
| 2.19 生物信息学分析 | 第50-51页 |
| 第三章 糖多孢红霉菌SACE_Lrp对红霉素生物合成的调控 | 第51-70页 |
| 3.1 前言 | 第51-53页 |
| 3.2 SACE_Lrp直接结合SACE_Lrp-5387间隔区DNA | 第53-56页 |
| 3.2.1 SACE_Lrp蛋白的表达与纯化 | 第53-55页 |
| 3.2.2 SACE_Lrp蛋白与SACE_Lrp-5387-int的EMSA分析 | 第55-56页 |
| 3.3 SACE_Lrp基因的体内功能研究 | 第56-59页 |
| 3.3.1 △SACE_Lrp缺失突变株的构建 | 第56-58页 |
| 3.3.2 SACE_Lrp的回复 | 第58-59页 |
| 3.3.3 SACE_Lrp的过表达 | 第59页 |
| 3.4 △SACE_Lrp红霉素生物合成产量的分析 | 第59-60页 |
| 3.5 △SACE_Lrp生物量和形态分化的分析 | 第60-62页 |
| 3.6 △SACE_Lrp中相关基因转录水平的检测 | 第62-63页 |
| 3.7 SACE_Lrp蛋白的EMSA分析 | 第63-64页 |
| 3.8 △SACE_Lrp胞内外分支氨基酸含量的分析 | 第64-66页 |
| 3.9 SACE_5387-5386过量表达对红霉素产量的影响 | 第66-67页 |
| 3.10 发酵培养中添加分支氨基酸对红霉素产量的影响 | 第67-68页 |
| 3.11 小结 | 第68-70页 |
| 第四章 SACE_Lrp结合的靶序列及配体氨基酸的解析 | 第70-81页 |
| 4.1 前言 | 第70页 |
| 4.2 DNase I Footprinting解析SACE_Lrp保守结合序列 | 第70-72页 |
| 4.2.1 DNase I足迹法解析SACE_Lrp蛋白的保守结合序列 | 第70-71页 |
| 4.2.2 SACE_Lrp保守结合序列的精确定位 | 第71-72页 |
| 4.3 SACE_Lrp双向配体氨基酸的解析 | 第72-76页 |
| 4.3.1 SACE_Lrp蛋白的配体氨基酸的EMSA分析 | 第72-74页 |
| 4.3.2 SACE_Lrp蛋白的配体氨基酸的GFP报告系统分析 | 第74-76页 |
| 4.4 SACE_Lrp自我调控作用 | 第76-80页 |
| 4.4.1 SACE_Lrp和SACE_5387-5386启动子区的预测分析 | 第76-77页 |
| 4.4.2 GFP报告系统分析SACE_Lrp对自身转录的调控 | 第77-80页 |
| 4.5 小结 | 第80-81页 |
| 第五章 以SACE_Lrp调控元件为基础的红霉素工业高产菌株的改造 | 第81-86页 |
| 5.1 前言 | 第81页 |
| 5.2 WB△SACE_Lrp和WB/5387-5386的构建 | 第81-82页 |
| 5.3 WB△SACE_Lrp/5387-5386的构建 | 第82-83页 |
| 5.4 WB△SACE_Lrp/5387-5386发酵培养中添加Val对红霉素产量的影响 | 第83-85页 |
| 5.4.1 WB△SACE_Lrp/5387-5386发酵培养中添加Val的摇瓶发酵检测 | 第83-84页 |
| 5.4.2 WB△SACE_Lrp/5387-5386发酵培养中添加Val的5-L发酵罐检测 | 第84-85页 |
| 5.5 小结 | 第85-86页 |
| 第六章 天蓝色链霉菌中Lrp同源蛋白的功能研究 | 第86-106页 |
| 6.1 前言 | 第86-87页 |
| 6.2 SCO3361基因的体内功能研究 | 第87-91页 |
| 6.2.1 △SCO3361突变株的构建 | 第87-89页 |
| 6.2.2 SCO3361的回复 | 第89-90页 |
| 6.2.3 SCO3361的过表达 | 第90-91页 |
| 6.3 △SCO3361中次级代谢产物的分析 | 第91-92页 |
| 6.4 △SCO3361生物量和形态分化的分析 | 第92-94页 |
| 6.5 △SCO3361中相关基因转录水平的检测 | 第94-96页 |
| 6.6 SCO3361蛋白的EMSA分析 | 第96-99页 |
| 6.6.1 SCO3361蛋白的表达与纯化 | 第96-97页 |
| 6.6.2 SCO3361蛋白的EMSA分析 | 第97-99页 |
| 6.7 SCO3361配体氨基酸的解析 | 第99-103页 |
| 6.7.1 SCO3361蛋白的配体氨基酸的EMSA分析 | 第99-101页 |
| 6.7.2 SACE_Lrp蛋白的配体氨基酸的GFP报告系统分析 | 第101-103页 |
| 6.8 SCO3361与SACE_Lrp的交叉调控作用 | 第103-104页 |
| 6.9 小结 | 第104-106页 |
| 第七章 总结与展望 | 第106-109页 |
| 7.1 全文总结 | 第106-107页 |
| 7.2 研究展望 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 科研成果 | 第120页 |
