| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 一 转录因子通过与启动子DNA作用调节基因表达(文献综述) | 第11-21页 |
| 1.1 前言 | 第11-12页 |
| 1.2 转录调节相关蛋白 | 第12-21页 |
| 1.2.1 RNA聚合酶对转录的调控作用 | 第12-13页 |
| 1.2.2 H-NS蛋白对转录的调节作用 | 第13-15页 |
| 1.2.3 Fur蛋白对转录的调控作用 | 第15-19页 |
| 1.2.4 DnaA蛋白对转录的调控作用 | 第19页 |
| 1.2.5 LexA蛋白对转录的调控作用 | 第19-20页 |
| 1.2.6 小结 | 第20-21页 |
| 二 大肠杆菌DnaA和LexA蛋白影响ybfE基因的表达 | 第21-52页 |
| 2.1 引言 | 第21-22页 |
| 2.1.1 ybfE基因研究现状 | 第21页 |
| 2.1.2 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-31页 |
| 2.2.1 质粒及菌种 | 第22-25页 |
| 2.2.2 引物 | 第25-26页 |
| 2.2.3 培养基 | 第26-28页 |
| 2.2.3.1 LB培养基 | 第26-27页 |
| 2.2.3.2 ABTG-CAA培养基的配制 | 第27-28页 |
| 2.2.4 实验试剂 | 第28-30页 |
| 2.2.4.1 抗生素 | 第28页 |
| 2.2.4.2 gel-shift缓冲液和胶的配制 | 第28-29页 |
| 2.2.4.3 ONPG | 第29-30页 |
| 2.2.4.4 其他常用试剂的配制 | 第30页 |
| 2.2.5 酶类与试剂盒 | 第30-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-38页 |
| 2.3.1 制备感受态细胞 | 第31-32页 |
| 2.3.1.1 电转化感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.3.1.2 热击感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.2 细胞转化 | 第32页 |
| 2.3.2.1 电击转化法 | 第32页 |
| 2.3.2.2 热击转化法 | 第32页 |
| 2.3.3 一步失活法构建启动子活性分析细胞 | 第32-35页 |
| 2.3.4 P1转导 | 第35页 |
| 2.3.5 改变启动子活性分析细胞中DnaA蛋白的可用量 | 第35-36页 |
| 2.3.5.1 过量表达启动子活性分析细胞中DnaA蛋白 | 第35页 |
| 2.3.5.2 把额外的datA引入启动子活性分析细胞 | 第35-36页 |
| 2.3.6 构建突变质粒 | 第36-37页 |
| 2.3.7 Miller法检测β-半乳糖苷酶活性 | 第37页 |
| 2.3.7.1 制备样品 | 第37页 |
| 2.3.7.2 测定β-半乳糖苷酶活性 | 第37页 |
| 2.3.7.3 计算β-半乳糖苷酶相对活性 | 第37页 |
| 2.3.8 gel-shift检测LexA蛋白与ybfE启动子的作用 | 第37-38页 |
| 2.4 实验结果 | 第38-50页 |
| 2.4.1 ybfE启动子区含有DnaA-box和LexA-box | 第38-39页 |
| 2.4.2 在dnaA345突变体中ybrE的表达量提高 | 第39-41页 |
| 2.4.3 改变DnaA蛋白的可用量不影响ybfE基因的表达 | 第41-42页 |
| 2.4.4 过表达YbfE蛋白会降低ybfE启动子的活性 | 第42-44页 |
| 2.4.5 删除LexA蛋白不影响ybfE基因的表达 | 第44-45页 |
| 2.4.6 在lexA3突变体中ybfE基因的表达没有变化 | 第45-46页 |
| 2.4.7 LexA蛋白结合ybfE启动子 | 第46-47页 |
| 2.4.8 突变DnaA-box或者LexA-box不影响ybfE基因的表达 | 第47-50页 |
| 2.5 讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
