| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 主要缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-30页 |
| 1.1 高等植物蔗糖转运蛋白的研究 | 第14-15页 |
| 1.1.1 光合作用产物的运输 | 第14页 |
| 1.1.2 植物蔗糖转运蛋白的结构 | 第14-15页 |
| 1.2 茄科植物蔗糖转运蛋白综述 | 第15-20页 |
| 1.2.1 茄科植物简介 | 第15-16页 |
| 1.2.2 茄科植物蔗糖转运蛋白的分类 | 第16-17页 |
| 1.2.3 茄科植物蔗糖转运蛋白的定位 | 第17-18页 |
| 1.2.4 茄科植物蔗糖转运蛋白的功能 | 第18-19页 |
| 1.2.5 马铃薯蔗糖转运蛋白的研究现状 | 第19-20页 |
| 1.3 RNA干扰技术 | 第20-26页 |
| 1.3.1 RNA干扰技术原理 | 第20-22页 |
| 1.3.2 传统方法构建RNA干扰载体 | 第22-23页 |
| 1.3.3 快速构建RNA干扰载体 | 第23-24页 |
| 1.3.4 RNA干扰中的siRNA与miRNA | 第24-25页 |
| 1.3.5 TOPO克隆 | 第25-26页 |
| 1.4 农杆菌遗传转化技术 | 第26-28页 |
| 1.4.1 激素配比对遗传转化植株的影响 | 第26-27页 |
| 1.4.2 抗生素浓度对转基因植株的影响 | 第27页 |
| 1.4.3 马铃薯品种对转化率的影响 | 第27-28页 |
| 1.5 研究目的、意义及技术路线 | 第28-30页 |
| 1.5.1 研究的目的和意义 | 第28页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第28-30页 |
| 第二章 马铃薯StSUT2基因干扰载体的构建 | 第30-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-32页 |
| 2.1.1 供试植物 | 第30页 |
| 2.1.2 实验用质粒载体 | 第30页 |
| 2.1.3 实验用菌株 | 第30页 |
| 2.1.4 酶及生化试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.5 实验用仪器 | 第31页 |
| 2.1.6 本实验中所用到的引物 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-39页 |
| 2.2.1 马铃薯植物总RNA的提取 | 第32页 |
| 2.2.2 用反转录试剂盒获得cDNA | 第32-33页 |
| 2.2.3 干扰片段克隆及胶回收 | 第33-35页 |
| 2.2.4 构建入门载体并转化至E. coli中 | 第35-36页 |
| 2.2.5 提取pENTR-SUT2载体和pHELLSGATE 12 表达载体质粒 | 第36-37页 |
| 2.2.6 建立LR重组体系 | 第37-38页 |
| 2.2.7 筛选阳性克隆并测序 | 第38-39页 |
| 2.3 结果与分析 | 第39-44页 |
| 2.3.1 植物总RNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.3.2 干扰片段的扩增 | 第40页 |
| 2.3.3 pENTR-SUT2载体检测 | 第40-42页 |
| 2.3.4 pSUT2-RNAi载体的构建 | 第42页 |
| 2.3.5 干扰载体pSUT2-RNAi的阳性鉴定 | 第42-44页 |
| 2.4 讨论 | 第44-45页 |
| 2.4.1 pSUT2-RNAi载体的构建 | 第44-45页 |
| 2.4.2 影响干扰效率的因素 | 第45页 |
| 2.5 小结 | 第45-46页 |
| 第三章 马铃薯StSUT2基因对马铃薯的遗传转化 | 第46-57页 |
| 3.1 实验材料 | 第46-48页 |
| 3.1.1 供试植物 | 第46页 |
| 3.1.2 实验用质粒载体 | 第46页 |
| 3.1.3 实验用菌株 | 第46页 |
| 3.1.4 生化试剂 | 第46-47页 |
| 3.1.5 实验用仪器 | 第47页 |
| 3.1.6 检测引物 | 第47-48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-52页 |
| 3.2.1 农杆菌GV3101感受态的制备 | 第48页 |
| 3.2.2 冻融法将pSUT2-RNAi载体转至农杆菌感受态中 | 第48页 |
| 3.2.3 农杆菌GV3101介导的马铃薯遗传转化 | 第48-51页 |
| 3.2.4 转基因植株的阳性检测 | 第51-52页 |
| 3.3 结果与分析 | 第52-56页 |
| 3.3.1 农杆菌中pSUT2-RNAi的检测 | 第52-53页 |
| 3.3.2 含pSUT2-RNAi载体转化株的获得 | 第53-54页 |
| 3.3.3 转化株PCR扩增检测 | 第54-55页 |
| 3.3.4 转化株的相对定量表达分析 | 第55-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56页 |
| 3.5 小结 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文 | 第67页 |
