| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第15-43页 |
| 第一章 转基因动物研究进展 | 第15-31页 |
| 1.1 转基因动物的发展史 | 第15-16页 |
| 1.2 转基因动物的应用 | 第16-21页 |
| 1.2.1 转基因动物在理论研究上的应用 | 第16页 |
| 1.2.2 转基因动物在医学上的应用 | 第16-18页 |
| 1.2.3 转基因动物在农业上的应用 | 第18-21页 |
| 1.3 基因打靶技术的研究进展 | 第21-31页 |
| 1.3.1 转座子 | 第21-25页 |
| 1.3.2 锌指核酸酶 | 第25-27页 |
| 1.3.3 TALEN | 第27-28页 |
| 1.3.4 RGEN（CRISPR/Cas RNA-Guided Nuclease）系统 | 第28-31页 |
| 第二章 TALEN在动物遗传修饰中的应用 | 第31-43页 |
| 2.1 TALEN的发明 | 第31-32页 |
| 2.2 TALEN的设计与构建 | 第32-35页 |
| 2.2.1 TALEN的设计 | 第32-33页 |
| 2.2.2 TALEN表达载体的构建方法 | 第33-35页 |
| 2.3 TALEN与ZFN和RGEN的特点比较 | 第35-39页 |
| 2.3.1 切割成功率和切割效率 | 第36页 |
| 2.3.2 DNA序列识别特异性 | 第36-37页 |
| 2.3.3 细胞毒性 | 第37-39页 |
| 2.4 TALEN介导的基因修饰的应用 | 第39-43页 |
| 2.4.1 在细胞水平上的应用 | 第40-41页 |
| 2.4.2 在模式动物上的应用 | 第41页 |
| 2.4.3 在家畜上的应用 | 第41-43页 |
| 试验研究 | 第43-106页 |
| 第三章 TALEN真核表达载体的构建及活性分析 | 第43-57页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第43-44页 |
| 3.1.1 材料 | 第43页 |
| 3.1.2 试剂 | 第43-44页 |
| 3.2 方法 | 第44-49页 |
| 3.2.1 TALEN真核表达载体的构建 | 第44-46页 |
| 3.2.2 TALEN在 293-FT细胞中的切割活性分析 | 第46-47页 |
| 3.2.3 TALEN在BFFs细胞中的切割活性分析 | 第47-49页 |
| 3.2.4 TALE切.酶的构建及活性检测 | 第49页 |
| 3.3 结果 | 第49-56页 |
| 3.3.1 TALEN真核表达载体的构建 | 第49-52页 |
| 3.3.2 TALEN在 293-FT细胞中的切割活性分析 | 第52页 |
| 3.3.3 TALEN在BFFs细胞中的切割活性分析 | 第52-54页 |
| 3.3.4 TALE核酸切.酶活性检测 | 第54-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56页 |
| 3.5 小结 | 第56-57页 |
| 第四章 SP110定点打靶细胞筛选及转基因牛生产 | 第57-74页 |
| 4.1 材料和试剂 | 第57-58页 |
| 4.1.1 材料 | 第57页 |
| 4.1.2 试剂 | 第57-58页 |
| 4.2 方法 | 第58-63页 |
| 4.2.1 MSR1启动子活性验证 | 第58-59页 |
| 4.2.2 小鼠SP110基因功能验证 | 第59-60页 |
| 4.2.3 打靶载体构建 | 第60-61页 |
| 4.2.4 细胞筛选及验证 | 第61-63页 |
| 4.2.5 体细胞核移植生产转基因牛 | 第63页 |
| 4.3 结果 | 第63-73页 |
| 4.3.1 MSR1启动子活性验证 | 第63-64页 |
| 4.3.2 SP110基因功能验证 | 第64-66页 |
| 4.3.3 打靶载体构建 | 第66-67页 |
| 4.3.4 细胞筛选及验证 | 第67-71页 |
| 4.3.5 体细胞核移植生产转基因牛 | 第71-73页 |
| 4.4 讨论 | 第73页 |
| 4.5 小结 | 第73-74页 |
| 第五章 转基因牛抗结核菌验证 | 第74-96页 |
| 5.1 材料和试剂 | 第74-75页 |
| 5.1.1 材料 | 第74页 |
| 5.1.2 试剂 | 第74-75页 |
| 5.2 方法 | 第75-80页 |
| 5.2.1 Junction PCR | 第75页 |
| 5.2.2 Genome walking | 第75页 |
| 5.2.3 Southern blot | 第75页 |
| 5.2.4 Western Blot | 第75-76页 |
| 5.2.5 Real Time RT-PCR | 第76-77页 |
| 5.2.6 细胞CFU计数 | 第77页 |
| 5.2.7 流式细胞术分析凋亡率 | 第77页 |
| 5.2.8 病理学评分系统 | 第77-78页 |
| 5.2.9 器官CFU计数 | 第78页 |
| 5.2.10 结核菌传染实验 | 第78页 |
| 5.2.11 结核菌素皮肤试验 | 第78-79页 |
| 5.2.12 IFN-γ释放水平检测 | 第79页 |
| 5.2.13 酶联免疫斑点试验（ELISPOT） | 第79页 |
| 5.2.14 苏木精-伊红染色（HE染色） | 第79页 |
| 5.2.15 数据统计分析 | 第79-80页 |
| 5.3 结果 | 第80-94页 |
| 5.3.1 Junction PCR验证阳性细胞 | 第80页 |
| 5.3.2 Genome walking验证阳性细胞 | 第80-81页 |
| 5.3.3 Southern Blot筛选单等位基因打靶克隆 | 第81-82页 |
| 5.3.4 Western Blot验证SP110基因的表达 | 第82页 |
| 5.3.5 外周血单核细胞诱导分化为巨噬细胞 | 第82-83页 |
| 5.3.6 Real-Time RT PCR检测临近基因表达水平 | 第83-84页 |
| 5.3.7 细胞水平上攻菌后CFU计数 | 第84-85页 |
| 5.3.8 流式细胞术分析细胞死亡方式 | 第85页 |
| 5.3.9 体内攻菌后的病理评分 | 第85-87页 |
| 5.3.10 体内攻菌后的器官CFU计数 | 第87页 |
| 5.3.11 传染实验中的结核菌素皮试检测 | 第87-88页 |
| 5.3.12 传染实验中的IFN-γ释放水平 | 第88-89页 |
| 5.3.13 酶联免疫斑点检测产生IFN-γ反应的细胞数 | 第89-90页 |
| 5.3.14 传染实验后的病理学评分 | 第90-91页 |
| 5.3.15 传染实验后的病理切片检测 | 第91页 |
| 5.3.16 SP110转基因牛子代分析 | 第91-94页 |
| 5.4 讨论 | 第94-95页 |
| 5.5 小结 | 第95-96页 |
| 第六章 TALE核酸切.酶应用评估 | 第96-106页 |
| 6.1 材料和试剂 | 第96-97页 |
| 6.1.1 材料 | 第96页 |
| 6.1.2 试剂 | 第96-97页 |
| 6.2 方法 | 第97-98页 |
| 6.2.1 针对F-A位点TALEN表达载体的构建 | 第97页 |
| 6.2.2 BFF细胞中检测F-A位点TALENs的切割活性 | 第97页 |
| 6.2.3 转基因克隆胚构建以及体细胞核移植 | 第97页 |
| 6.2.4 Real-Time PCR检测F-A位点临近基因的表达水平 | 第97-98页 |
| 6.2.5 TALEN的脱靶效应分析 | 第98页 |
| 6.3 结果 | 第98-104页 |
| 6.3.1 TALEN在F-A位点打靶 | 第98-101页 |
| 6.3.2 TALEN的脱靶效应分析 | 第101-104页 |
| 6.4 讨论 | 第104-105页 |
| 6.5 小结 | 第105-106页 |
| 全文结论 | 第106-107页 |
| 创新之处和进一步研究的课题 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-122页 |
| 附录 | 第122-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
| 个人简介 | 第138页 |
